正交设计优化青蒿SRAP-PCR反应体系及引物筛选

为了建立青蒿的SRAP最佳扩增体系,并筛选出SRAP多态性引物,本研究以青蒿叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg^2+、dNTP Mix、Taq DNA聚合酶、引物和DNA模板5种因素5个水平,对青蒿SRAP反应体系进行研究。结果表明,青蒿SRAP-PCR最佳反应体系为:引物0.6μmol/L、Mg^2+2.0 mmol/L、模板DNA 5.1 ng、Taq DNA聚合酶2.0 U、dNTPs 0.25 mmol/L,总体积为25μL。各因素对扩增反应均有不同影响,其中引物浓度的影响最大,dNTPs的影响最小。运用该体系对不同种质资源的青蒿进行验证,证明该体系稳定可靠,并在30个引物组合中筛选出了25对扩增条带清晰,多态性丰富的引物组合。这一结论为今后利用SRAP标记技术进行青蒿分子遗传学研究提供了科学依据。     

微卫星标记及其在遗传育种中的应用

微卫星是近年来常用的一种检测基因组DNA多态性的新型DNA标记，因其数量分布广，多态性丰富及检测快速方便等优点而备受青睐，本文就微卫星结构，践态性产生原理和微卫星的应用作一简明介绍。     

鸡的微卫星DNA标记与胴体性状的相关分析

测定了青脚麻鸡与隐性白鸡杂交后自交的F2代个体的全净堂重、全净堂率、脂肪宽带、腹脂重和腹脂率6个胴体性状,检测10个微卫星DNA标记,对标记基因型胴体性状值进行方差分析和多重比较,结果表明:MCW328对于10周龄体重和全净膛重两性状各基因型均有显著的差异(P<0.05);ADL292对于腹脂重性状各基因型有极显著的差异(P<0.01),对于腹脂率有显著的差异(P<0.05)。MCW328标记基因与控制10周龄体重和全净膛重QTL连锁,ADL292标记基因与控制腹脂重和腹脂率QTL连锁。     

微卫星DNA标记技术在畜禽遗传多样性研究中的应用

20世纪70年代人们已经知道，微卫星位点是广泛分布于真核生物基因组中的一种特殊序列，但直到1982年Hamada等在研究中发现从酵母到脊椎动物中普遍存在着多拷贝的多聚(dT-dG)微卫星DNA，Tautz和Rentz证实了这一发现。尽管从发现到现在只有二三十年的时间，但由于微卫星具有种类多、多态性高、进化速度快以及呈孟德尔共显性遗传等优点，使其     

中国西门塔尔牛第6号染色体上部分微卫星的特征

利用微卫星技术对牛第6号染色体上9个微卫星位点进行了研究,检测其在中国西门塔尔牛育种核心群中152头母牛的多态性。本试验9个位点中,BM4528为单态,BM4203属于中度多态位点(0.5>PIC>0.25),而其它的7个位点均是高度多态位点(PIC>0.5)。     

RAPD技术对地方鸡种群体遗传结构的分析

利用ＲＡＰＤ技术对４个地方鸡种和１个引进鸡种的群体遗传结构进行分析，通过筛选的５个随机引物ＯＰＨ－０２、ＯＰＨ－０５、ＯＰＨ－１３、ＯＰＨ－１６、ＯＰＧ－０７对５个鸡种的池ＤＮＡ进行多态性研究，结果表明：５个引物共产生条带６１个，扩增产物片段的长度一般从１５０ｂｐ－４ｋｂ。     

近交系大鼠DNA指纹图与微卫星DNA比较分析

为了建立一种对近交系大鼠遗传物质进行精确可靠、快速简便的监测方法,利用DNA指纹技术对国内6个品系8个近交系大鼠群体进行了DNA多态性的分析,并与PCR扩增微卫星DNA技术进行了比较.其结果显示(1)不同品系之间DNA指纹图差异较大,同一群体不同个体间DNA指纹图带的相似系数和共有带率除SHR(哈)和WKY(哈)小于0.7外,其他均大于0.9.不同地区同一SHR间和WKY间DNA指纹图也存在差异,相同DNA不同次制作的DNA指纹图谱基本一致.(2)不同品系个体间微卫星DNA具有显著多态性;同一群体不同个体之间除SHR(哈)的SMST位点和WKY(哈)的AGT位点出现一定的差异外,其他均没有差异.DNA指纹图能更精确可靠地反映出动物个体间的遗传背景,而微卫星DNA遗传监测方法比较简便快捷.     

近交系大鼠DNA指纹图与微卫星DNA比较分析

为了建立一种对近交系大鼠遗传物质进行精确可靠、快速简便的监测方法，利用DNA指纹技术对国内6个品系8个近交系大鼠群体进行了DNA多态性的分析，并与PCR扩增微卫星DNA技术进行了比较。其结束显示：(1)不同品系之间DNA指纹图差异较大，同一群体不同个体间DNA指纹图带的相似系数和共有带率除SHR（哈)和WKY(哈)小于0．7外，其他均大于0．9。不同地区同一SHR间和WKY间DNA指纹图也存在差异，相同DNA不同次制作的DNA指纹图谱基本一致。(2)不同品系个体间微卫星DNA具有显著多态性；同一群体不同个体之间除SHR(哈)的SMST位点和WKY(哈)的AGT位点出现一定的差异外，其他均没有差异。DNA指纹图能更精确可靠地反映出动物个体间的遗传背景，而微卫星DNA遗传监测方法比较简便快捷。     

不同引物对植原体的检测灵敏度比较研究

用常规PCR和巢式PCR对目前常用的各种植原体引物(fPl/rP7、fU5/rP7、fU5／rU3、fAY/rEY和fFD9/rFD9)的检测灵敏度进行了比较研究。研究发现，它们的检测灵敏度并不相同。最灵敏的引物(fAY/rEY)要比最不灵敏的引物(fFD9/rFD9)的灵敏度至少高出数千倍。因此，按照不同的检测目的选择所用的检测引物是明智的，特别是当待测样品中的植原体浓度极低时，比如葡萄组织样品中植原体的检测。据此提出了用于不同检测目的时的最佳引物。     

利用微卫星标记分析贵州5个地方鸡品种遗传多样性

通过选用30个多态性较好的微卫星标记,检测了贵州省5个地方鸡品种:竹乡鸡、威宁鸡、黔东南小香鸡、高脚鸡、乌蒙乌骨鸡的遗传多样性。计算了各群体的平均遗传杂合度(H)、多态信息含量(PIC)和群体间的DA遗传距离。结果表明:在5个品种中,杂合度最低的是高脚鸡,为0.501,杂合度最高的是竹乡鸡,为0.673,因此贵州各地方鸡品种的杂合度相差较大,据分析可能是由于交通闭塞,形成了家禽品种的多种多型,而且杂合度的高低与PIC值的大小体现了较高的一致性;用UPGMA法进行聚类分析,结果6个鸡品种被聚为3类:竹乡鸡、黔东南小香鸡和威宁鸡聚为一类,乌蒙乌骨鸡自聚为一类;高脚鸡独自聚为一类。这与几个鸡品种的来源、分化、选育历史及地理分布是一致的。