酶联免疫斑点技术(ELISPOT)及其应用研究进展

酶联免疫斑点(Enzyme-linked Immunospot Assay,ELISPOT)技术是上世纪80年代发展起来的一种免疫学研究新技术,具有较高的特异性、敏感性和和准确性,被广泛应用于与免疫学相关的研究领域.本文介绍了ELISPOT的原理和特点,对ELISPOT的应用研究进展进行了综述.     

鸡减蛋综合症免疫斑点诊断法的研究

本研究以鸡减蛋综合症（EDS－76）为模型，对常规的免疫斑点（IB）试验做了改进，在对各主要参数进行系统测定的基础上，建立了可用于检测EDS－76的IB诊断法。在该方法中，病鸡血清呈“＋”形染色，健康鸡血清呈“－”形染色，从而使检测结果与判定符号实现了统一。对16种鸡病的标准阳笥血清、EDS－79病毒人工感染鸡血清、临床健康鸡血清和SPF鸡血清的检测结果及与现行的EDS－76血凝抑制（HI）试验和琼旨扩散（AD）试验比较表明，IB试验不仅特异、敏感，而且简便、快速。本研究在禽病系列诊断试剂盒的研制方面是一个有益的尝试。     

江苏省发布2项植保类地方标准

<正>江苏省质量技术监督局近日依法批准发布以下2项植保类本省地方标准:1.风送式高射程喷雾机安全施药技术规范(地方标准编号:DB32/T1742-2011),自2011年6月15日起实施。2.灰飞虱携带水稻黑条矮缩病毒免疫斑点检测方     

猪场疫苗免疫效果监测评估

猪场养殖过程中猪病的防控至关重要,疫苗免疫是综合防控的中重要环节,疫苗免疫中疫苗的质量、免疫剂量、饲养管理等因素都会影响疫苗的免疫效果。疫苗免疫效果如何,能否起到刺激机体产生有效免疫保护都需要进行免疫效果的评估,积极有效的评估方法对检验猪场的疫苗免疫效果十分重要,文章对疫苗免疫效果评估的方法进行综述,旨在为养猪从业者提供参考。     

人IgG诱导尼罗罗非鱼特异性抗体分泌细胞的ELISPOT检测

通过酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测了经人 IgG 免疫后尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)头肾、外周血和脾脏中的特异性抗体分泌细胞(antibody secreting cell, ASC)数量。结果表明, 首次免疫 1 d 后可在头肾中检测出 ASC, 而外周血和脾脏第 3 天才能检测出 ASC; 头肾、外周血以及脾脏中的 ASC 均在第 12 天达到峰值, 随后头肾, 外周血中的 ASC 数量显著减少, 而在脾脏中 ASC 数量减少不显著。二次免疫 1 d 后在头肾、外周血和脾脏中均可检测到 ASC, ASC 数量均在第 9 天达到峰值, 时间早于首次免疫, 且在首次免疫和二次免疫中, 头肾组织的 ASC 数量均是 3 个组织中最高的。酶联免疫吸附试验(ELISA)分别对首次免疫和二次免疫后血清中的抗体水平检测发现, 其变化趋势与 ASC 数量变化规律相同。研究结果表明, 尼罗罗非鱼在初次免疫后产生了免疫记忆, 在二次免疫过程中产生了更多的 ASC 和抗体, 头肾是 ASC 的主要来源组织。该结果可为鱼类的免疫记忆研究提供重要的科学依据。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)诱导特异性IFN-γ~+T细胞反应的研究

为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)活疫苗(HuN4-F112株)诱导的特异性IFN-γ+T细胞反应与其保护作用的相关性,本研究将25头45日龄PRRSV阴性健康仔猪随机均分为5组,第1～3组分别于0 d、7 d、14 d免疫HuN4-F112疫苗(1头份/头,106.0TCID50),第4组为攻毒对照组,第1～4组于21 d用PRRSV强毒株HuN4-F5攻毒(3 mL/头,104.0TCID50),第5组为空白对照组。疫苗免疫后1周～2周产生部分保护,3周产生完全保护,第1～4组保护率分别为5/5、2/5、2/5和0/5。中和抗体检测显示免疫组免疫后7 d和14 d所有猪只均未检测到中和抗体,免疫后第21 d第1组4头猪检测到低效价(≤1∶8)的中和抗体。疫苗免疫后血清中IFN-γ含量略有升高,但变化不大,整体都处于较低的水平。采用酶联免疫斑点技术(ELISpot)检测PRRSV特异性IFN-γ+T细胞反应。免疫组免疫后7 d、14 d、21 d百万外周血单个核细胞中IFN-γ+T细胞频数分别为0±0、0±2、5±8,组间和组内统计分析显示差异不显著。结果表明在HuN4-F112株疫苗早期保护中,IFN-γ参与的特异性细胞免疫反应较弱,在早期免疫阶段难以发挥主要作用。本研究为了解PRRSV疫苗免疫保护机制提供参考,同时,也提示需要采用更多的指标和方法来评价该疫苗诱导的免疫反应。     

不同CSF免疫状态下猪PRRS易感性及IFN-γ分泌细胞应答

采用酶联免疫斑点检测技术（ELISpot）检测自然状态下猪外周血单核细胞（PBMC）中分泌IFN-γ的细胞数,并用带T细胞表位的猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）特异性小分子多肽刺激培养的PBMC,观察IFN-γ的分泌变化。结果显示,猪瘟病毒（Classical fever virus,CSFV）抗体阳性组中感染PRRSV比率小于CSFV抗体阴性组。CSFV抗体阳性猪PBMC中IFN-γ分泌细胞数量均高于CS—FV抗体阴性组,CSFV抗体阴性且受PRRSV感染猪的PBMC对PRRSV多肽刺激不应答。结果表明,对CSFV疫苗应答好的猪对PRRSV感染有一定的抵抗,其细胞免疫处于活动状态,提示2种传染病的免疫应答机理有部分相关性。     

应用酶免疫斑点检验检测猪布病的研究

本文应用酶免疫斑点试验和试管凝集试验两种方法检测血清６８１份，作布氏病普查及两种方法检测结果比较。试验表明布氏菌和０：９型耶氏菌有强烈的血清交叉反应，酶免疫斑点试验能明确区别两种交叉抗体，因而具有较高的检测准确性。