IWF诱导小麦悬浮细胞产生NO及其与Ca2+的关系

 【目的】以感染叶锈菌的小麦叶片细胞间隙液IWF-260作为激发子,刺激小麦洛夫林10悬浮细胞,探讨悬浮细胞受激发子刺激引发的NO变化情况及其产生的可能分子机制。【方法】采用Greiss试剂法及荧光分子探针DAF-2DA标记法检测胞内NO的动态变化,同时借助药物学试验探讨Ca2+和NO的关系。【结果】IWF-260能诱导小麦悬浮细胞产生NO,NO在IWF-260刺激诱发的细胞死亡过程中发挥重要作用。药物学抑制剂试验证明NOS和NR及胞外钙离子内流均与IWF-260刺激小麦悬浮细胞产生的NO有密切关系,且在NO的产生途径中,NR途径为主要途径。【结论】IWF-260能够诱导小麦悬浮细胞产生NO,NOS、NR及胞外Ca2+内流参与了此过程。     

小麦叶片胞间隙蛋白的提取与鉴定

采用真空渗入离心法,通过特定的装置并在不同的离心力和时间条件下分离小麦叶片胞间隙液,结合十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术,以胞内高含量的蛋白-Rubisco大亚基为胞内物污染的指示,利用高效价的兔抗Rubisco抗体进行Western-blotting检测分析。结果表明,在离心力为3 000g,离心时间为10,15和20 min所提的胞间隙液量最大,且均检测到Rubisco的污染。结合胞间隙液的产率确定小麦叶片胞间隙液提取最佳的离心条件应为离心力1 000~2 500 g,时间15~20 min。     

IWF诱导小麦悬浮细胞H2O2迸发及其产生机制初探#br#

【目的】采用具有激发子活性的感染叶锈菌的小麦叶片细胞间隙液IWF-260刺激小麦洛夫林10悬浮细胞,探讨细胞感受激发子刺激引发的H2O2迸发情况及其产生的可能分子机制。【方法】采用化学发光法以及荧光探针DCFHDA、HE来研究H2O2的迸发以及NADPH氧化酶的活化。同时借助药物学试验探讨Ca2+和活性氧的关系。【结果】IWF-260可以引起悬浮细胞H2O2爆发,其在IWF-260刺激诱发的细胞死亡过程中发挥重要作用。而质膜NADPH氧化酶的激活以及胞外钙离子的内流与H2O2爆发有密切关系。【结论】IWF-260能够诱导细胞产生活性氧,质膜NADPH氧化酶和胞外钙离子内流参与了活性氧爆发过程。     

感染叶锈菌的小麦细胞间隙液对小麦悬浮细胞程序性死亡的诱导

以小麦悬浮细胞为材料,分别用感染叶锈菌小种165的小麦细胞间隙液(IWF165)和未接菌的小麦细胞间隙液(IWFck)对其进行处理,处理后不同时间点取样进行形态学观察和DNA电泳。结果表明,用IWF165处理后的悬浮细胞可观察到明显的染色质凝聚化、边缘化和细胞核解体等现象;同时DNA电泳结果显示IWF165处理后的细胞基因组DNA发生降解并形成明显的DNA梯状条带。而用IWFck处理的悬浮细胞,其细胞核结构完整,染色质分布均匀;DNA电泳没有出现DNA梯状条带。在感染叶锈菌的小麦细胞间隙液中存在着激发子,它能够诱导小麦悬浮细胞发生程序性死亡。     

Evidence from electron-spin resonance for the formation of free radicals during infection of Avena sativa by Drechslera spp.

When the spin trap 1,2-dihydroxybenzene-3,5-disulphonate (tiron) is present in intercellular washing fluids of oat leaves inoculated with the highly virulent Drechslera avenae and Drechslera siccans an electron spin resonance (ESR) spectrum of four lines is obtained. The development of chlorosis and necrotic lesions coincided with the detection of the ESR signal indicative of oxygen radicals 62 h post inoculation. With the weakly virulent Drechslera graminea and Drechslera nobleae no ESR signal was detectable. Non-specific elicitors from mycelium of compatible and incompatible Drechslera spp. did not mediate an oxygen reduction in the intercellular space of oat leaflets. Consequently, these data suggest that oxygen radicals may trigger plant cellular necrosis.     

IWF诱导小麦悬浮细胞H_2O_2迸发及其产生机制初探

【目的】采用具有激发子活性的感染叶锈菌的小麦叶片细胞间隙液IWF-260刺激小麦洛夫林10悬浮细胞,探讨细胞感受激发子刺激引发的H2O2迸发情况及其产生的可能分子机制。【方法】采用化学发光法以及荧光探针DCFHDA、HE来研究H2O2的迸发以及NADPH氧化酶的活化。同时借助药物学试验探讨Ca2+和活性氧的关系。【结果】IWF-260可以引起悬浮细胞H2O2爆发,其在IWF-260刺激诱发的细胞死亡过程中发挥重要作用。而质膜NADPH氧化酶的激活以及胞外钙离子的内流与H2O2爆发有密切关系。【结论】IWF-260能够诱导细胞产生活性氧,质膜NADPH氧化酶和胞外钙离子内流参与了活性氧爆发过程。     

叶锈菌侵染的小麦细胞间隙液中激发子的分离纯化

【目的】在已经证明小麦与叶锈菌互作的小麦细胞间隙液（IWF）中存在具有蛋白质性质的激发子活性物质的基础上,以期通过试验得到激发子的纯品制剂,为进一步研究激发子的组成和结构、激发子受体以及寄主产生过敏性反应的信号转导机制提供基础条件。【方法】提取叶锈菌小种165侵染的小麦品种洛夫林10细胞间隙液,通过盐析、凝胶过滤柱层析和离子交换柱层析等分离纯化技术,对IWF中具有激发子活性的蛋白质组分进行分离纯化。【结果】分离出能诱导洛夫林10健康叶片PAL、PO活性增高并诱发洛夫林10悬浮细胞程序性死亡的激发子活性组分。该组分经SDS-PAGE电泳呈现单一条带,分子量约为32 kD。【结论】经硫酸铵分段盐析、凝胶过滤柱层析和离子交换柱层析等方法,从感染叶锈菌小种165的洛夫林小麦叶片细胞间隙液中分离出具有激发子活性的蛋白质组分。     

Cellulase in the Host–parasite System Phaseolus vulgaris (L.)–Uromyces appendiculatus [Pers.] Link

Activity of cellulase and xylanase in the intercellular washing fluid (IWF) of bean plants (Phaseolus vulgaris, cultivar Fori) was monitored during infection with bean rust (Uromyces appendiculatus). In infected plants, cellulase activity could be detected at 2 days after inoculation and reached its maximum between 7 and 8 days after inoculation. The enzyme activity was not detected in healthy controls. The cellulase had a pH optimum at pH 5.5 and a temperature optimum at 30°C. Complete inactivation of cellulase occurred after heating to 50°C for 30min. In non-denaturing polyacrylamide gradient gels, the enzyme exhibited four bands (molecular masses approximately 70, 95, 120, 170kDa). After isoelectric focusing, eight cellulase isoforms with pI values pI 4.6–4.8; 5–5.1; 5.4; 5.5; 5.9; 6; 6.5; 7 appeared. Two dimensional electrophoresis yielded 13 cellulase isoforms. Unlike cellulase, low levels of xylanase were detected in healthy controls. The activity of this hydrolase did not increase due to rust infection.