苜蓿假盘菌基因组DNA提取方法

以保定苜蓿上分离的苜蓿假盘菌为试验材料,采用SDS、SDS-CTAB及氯化苄3种方法提取基因组DNA,并进行比较。结果表明:3种方法均能提取到DNA,其中氯化苄法效果最佳,获得的DNA纯度高,此法操作简单、经济;其次是SDS-CTAB法,但DNA有所降解;而SDS法效果最差。此外还较详细地研究了采用氯化苄法提取缓冲液pH值、液氮和蛋白酶K对DNA提取效果的影响。     

扩展青霉基因组DNA五种提取方法比较

为寻找一种适合于扩展青霉基因组DNA的提取方法,比较了固体培养、液体静置培养和液体振荡培养3种培养方式的提取效果,分别采用氯化苄法、蜗牛酶法、CTAB法、SDS法及异硫氰酸胍法提取扩展青霉菌基因组DNA,经DNA质量浓度测定及电泳分析,比较5种方法的差异,并利用扩展青霉的多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase)基因内一段保守序列,设计PCR引物,扩增大小为288 bp的特异目的基因,检测其灵敏性.结果表明:固体培养的方式较适合扩展青霉基因组DNA的提取,另外5种提取方法均能提取出扩展青霉菌基因组DNA,扩增出目的条带,其中氯化苄法和蜗牛酶法所提DNA的纯度均较好,但蜗牛酶法所提DNA量较少.因此,氯化苄法是5种提取方法中最可靠的DNA提取方法,所提DNA浓度高、纯度好、结果稳定,可作为PCR反应的模板进行特异性扩增,且该方法的最低检测限大约为1.01×10-1μg/mL.     

提取地衣真菌总DNA的简便方法

利用液氮破碎地衣体的上下表皮层及藻层，再用氯化苄在弱碱条件下破坏真菌细胞壁，从而获得地衣真菌总ＤＮＡ．此方法简便、省时、价廉，获得的总ＤＮＡ蛋白质污染少，产量高，可进一步进行ＰＣＲ扩增．     

竹材加工剩余物苯甲基化改性试验

以竹子开条、开片或拉丝加工过程产生的长条状剩余物为研究对象,采用低温碱液润胀、苄化处理试验,系统研究了预处理及苄化反应条件对竹材增重率(苄化率)的影响;并借助FTIR、X-射线、SEM、DSC等现代分析手段研究分析了苄化竹材的微观结构、化学结构特征及热熔特征的变化规律。试验结果表明:碱液润胀工艺对竹材苄化增重率的影响最大,苄化试剂用量与反应时间对竹材苄化也有不同程度的作用。在试验范围内较佳的工艺条件为:碱液浓度22.5%、润胀时间10 h、苄化试剂用量50 mL、反应时间1 h。苄化增重率不同,苄化竹材的玻璃化转变温度有显著差异。将苄化增重率45%～50%的变性竹材按同纤维方向重组,可在温度为140℃、单位压力2.0MPa的条件下热压熔接成板。     

提取产气荚膜梭菌染色体DNA的新方法--氯化苄法

产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,又名魏氏梭菌Clostridium welchii)是广泛分布于土壤、大气、天然水域和正常动物肠道的一类温和厌氧菌.     

用于PCR检测的扩展青霉基因组DNA提取方法比较

为寻找一种经济、简便、高效的基因组DNA提取方法,进一步开展扩展青霉的分子生物学研究,采用氯化苄法、玻璃珠法、玻璃珠+氯化苄法、试剂盒法4种方法提取扩展青霉的基因组DNA,并测定DNA质量浓度以及进行PCR和电泳分析,比较不同提取方法的效果。结果表明,4种方法均可提取到基因组DNA,其抽提质量优劣依次为试剂盒法、玻璃珠+氯化苄法、玻璃珠法、氯化苄法。其中玻璃珠+氯化苄法提取效率接近试剂盒法,效果良好,并且此法成本低廉、操作简单、结果稳定,可代替昂贵的试剂盒法用于扩展青霉基因组DNA的提取。     

曲霉基因组DNA提取方法研究

利用SDS法、CTAB法和氯化苄法提取曲霉基因组DNA.结果表明: 这几种方法都不能有效提取曲霉基因组DNA,在总结前人方法的基础上摸索出一种提取曲霉基因组DNA的有效方法.用此方法所得的曲霉DNA质量和数量均理想,每克曲霉菌丝体能提取60μgDNA,样品的O.D260/280在1.7～2.0之间,分子量均在23 kb以上,一级结构完整.对提取的DNA作RAPD扩增取得了令人满意的结果.     

桃褐腐病菌孢子破壁及DNA提取方法研究

采用超声破碎法和反复冻融法对桃褐腐病菌孢子进行破壁,镜检结果发现超声破碎法优于反复冻融法,超声破碎条件为:超声3 s,间隔2 s,频率为99次,功率500 W,重复2次。此外,比较了用氯化苄法、液氮冷冻法和酸洗玻璃珠法提取的基因组DNA,发现氯化苄法效果较好。该方法以100 mM Tris-HClp、H 9.0与40 mM EDTAp、H 8.0的混合液为提取缓冲液,使氯化苄在碱性条件下与桃褐腐病菌的多糖成分发生反应,从而破坏细胞壁结构,证明是一种简便快速提取桃褐腐病菌DNA的有效方法。     

马铃薯晚疫病菌基因文库的构建

用酶一氯化苄法制备高分子量晚疫病菌总ＤＮＡ,通过Ｓａｕ３Ａ部分酶切并纯化后得到１５－２５ｋｂ的酶切片段,并以具有广寄主范围的柯斯质粒ＰＬＡ２９１７为载体,用Ｔ４ＤＮＡ连接酶连成为重组ＤＮＡ,包装到入噬菌体颗粒中,转染受体菌Ｅ．ｃｏｌｉＳ１７－１。利用四环素和卡那霉素抗性来筛选鉴定重组子,得到１０６５６个重组子,这些重组子群即为晚疫病菌的基因组文库。     

5种方法提取真菌基因组DNA作为PCR模板效果的比较

本研究旨在比较CTAB法、改良CTAB法、SDS法、氯化苄法和Chelex-100法提取真菌DNA作为PCR模板的效果,以生长速率、菌落形态差异较大的11个煤污病菌属真菌为研究对象,以核糖体RNA(r RNA)基因中的内转录间隔区(ITS)序列和28S r RNA基因部分序列的扩增率为指标,采用SPSS软件对结果进行方差分析。结果表明,CTAB法和改良CTAB法适用真菌范围最广,分别有7个和9个属真菌的扩增率都大于70%且无显著性差异;氯化苄法和Chelex-100法适用范围居中,分别有6个和8个属真菌的扩增率较高且无显著性差异,扩增率分别大于70%和50%;SDS法适用范围最窄,有6个属真菌的扩增率高于50%且无显著性差异。大多数煤污病菌至少有2种及以上的DNA提取方法能够取得较好的效果,但链丝孢属真菌只有用氯化苄法提取DNA效果最好。采用改良CTAB法结合氯化苄法,能够满足所有供试煤污病菌类群真菌提取基因组DNA用作PCR反应模板的需要。