斑点免疫吸附试验诊断羊脑多头蚴病的研究

以原头节可溶性粗抗原经Sephadex G-200层析纯化抗原为包被抗原，兔抗羊IgG-HRP结合物为显色剂，建立检测羊脑多头蚴病血清抗体的Dot-ELISA，并以ELISA作平行对照。结果，粗抗原和层析纯化抗原检测86头份羊脑多头蚴病阳性血清，其敏感性分别为94．18％和93．02％，两种抗原的敏感性无显著差异；检测122头份绦虫蚴病阴性血清，18头份棘球蚴病阳性血清，35头份细颈囊尾蚴病阳性血清，其特异性分别为90．29％和95．43％。两种抗原的特异性差异显著。Dot-ELISA和ELISA两种方法的符合率为100％。层析纯化抗原比粗抗原的特异性有了明显提高，而敏感性没有降低。层析纯化抗原和操作术式都具有良好的重复性，Dot-ELISA和ELISA对比试验结果相近，且具简便、快速及不需要复杂设备等优点，是一种检测羊脑多头蚴病血清抗体的理想方法。     

纳米酶免疫层析试纸条法检测玉米褪绿斑驳病毒

[目的]建立纳米酶免疫层析试纸条(Nanozyme Immuno-chromatographic Strip Assay,NISA)检测玉米褪绿斑驳病毒方法.[方法]采用双抗夹心法,将纳米酶标记的鼠抗体IgG与McmV结合后,再与硝酸纤维素膜质控线上的鼠抗体结合,二氨基联苯胺(Diaminobenzidine,DAB)...     

基于气象大数据的承德市避暑旅游景区评价

为了加强气象大数据在避暑旅游资源开发中的应用,提取承德市288个区域气象站的气温、湿度等资料、数字高程等资料,利用层次分析法对承德市47个主要旅游景区5—8月逐月建立避暑分级评价模型,基于GIS空间分析技术制作了承德市逐月避暑指数分布图。结果表明：5月下旬与8月承德县中南部、兴隆县东部景区有中暑的可能性,其他大部地区均凉爽舒适;6月最适宜避暑的景区位于承德市北部县区、平泉市大部;7月最宜避暑的景区位于坝上地区、围场县大部、丰宁县中北部、隆化县北部、平泉市北部,中南部景区均易发生中暑。     

农药残留快速检测技术的发展现状及微流控技术在农残快检中的应用前景

现阶段,农药残留快速检测技术应用最广泛的是酶抑制率法,此法在市场监管的基层执法中应用最多,但其先天存在很多不足,也使其使用效果大打折扣。而胶体金免疫层析法的优势虽然在于定性能力强、检出限更低,但其成本较高且只能做单一农药残留,在基层应用中效率太低从而未被广泛应用。微流控技术可以结合酶抑制率法的优势,在短时间内完成全自动检测,具有较好的应用前景。     

牙鲆血清免疫球蛋白的分离纯化及部分特性分析

运用Sephacryl S-200凝胶层析和HiTrap rProtein ASepharose亲和层析2种方法对牙鲆(Paralichthys olivaceus)血清免疫球蛋白进行分离纯化,结果表明,牙鲆免疫球蛋白分布于33%~50%的硫酸铵饱和溶液中,其中45%的分离效果最好。凝胶层析和亲和层析样品均出现2个蛋白峰,用还原SDS-PAGE检测确定牙鲆免疫球蛋白存在于第2个蛋白峰中。牙鲆免疫球蛋白重链分子量约为75.4 kD,轻链分子量约为29.9 kD和28.2 kD,推测牙鲆血清免疫球蛋白的分子量为836 kD。制备了兔抗牙鲆免疫球蛋白多克隆抗体,免疫双扩散法检测多克隆抗体效价为1∶32,免疫斑点法检测多克隆抗体效价至少为1∶1 600。运用免疫印迹法(Western-bloting)检测了兔抗牙鲆免疫球蛋白多克隆抗体的特异性,实验证明该抗体与牙鲆全血清中免疫球蛋白重链、轻链反应均成阳性。     

一种杂色曲霉素胶体金免疫快速检测试纸条的研制

通过制备杂色曲霉素半抗原,研制出一种能够检测饲料中杂色曲霉素的胶体金免疫层析试纸条,检测限为1μg/kg,检测时间仅为15 min,假阳性率和假阴性率均为0,符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求.试纸条能够在基层实验室的大批量样本检测中得到应用,具有实际意义,并且未见胶体金免疫层析法的相关文献报道,具有创新性.     

芋疫霉重组聚合酶扩增结合侧流层析试纸条快速检测方法的建立及应用

为建立芋疫霉Phytophthora colocasiae快速准确的分子检测方法,基于Ypt1基因特异序列,设计芋疫霉的特异性引物与探针,建立一种快速、准确、可视化的芋疫霉重组聚合酶扩增结合侧流层析试纸条（recombinase polymerase amplification-lateral flow dipstick,LFD-RPA）检测方法,对该检测方法进行优化,评估其特异性与灵敏度,并对田间疑似样品进行检测。结果表明,优化后的芋疫霉LFD-RPA检测方法最适反应条件为39℃恒温反应30 min。LFD-RPA检测方法能够特异性地检测出芋疫霉,而对其他卵菌近缘种和常见植物病原真菌均未检出,且该检测方法对芋疫霉DNA的检测灵敏度达到1 pg/μL。对田间带病组织检测发现,LFD-RPA检测方法能够快速准确地从田间自然发病植株中检测出芋疫霉。表明本研究所建立的芋疫霉LFD-RPA快速可视化检测方法特异性好、灵敏度高、简单快捷,可用于芋疫病的田间快速诊断。     

番茄环斑病毒和烟草环斑病毒复合型胶体金免疫层析试纸条的研制

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记番茄环斑病毒和烟草环斑病毒的兔多克隆抗体,用微定量喷头在硝酸纤维素膜上喷好2条病毒检测线（T线）和1条羊抗兔抗体质控线（C线）,制成复合型免疫层析检测试纸条。一张试纸条在10min内,可同时检测出这两种病毒。试纸条检测番茄环斑病毒和烟草环斑病毒粗提纯液,检测灵敏度在1μg/mL,试纸条检测番茄环斑病毒和烟草环斑病毒的混合病汁液可稀释1000倍（重量/体积）。用健康叶片和缓冲液对照测试,试纸条结果都为阴性。     

胶体金试纸条检测H9亚型禽流感病毒的研究

对禽流感病毒H9亚型血凝素单克隆抗体4C4进行胶体金标记,喷涂于玻璃纤维上制成金标垫,鸡抗AIVIgG和羊抗鼠IgG分别包被于硝酸纤维素（NC）膜上作为检测线和质控线,制作禽流感H9亚型免疫层析检测试纸条。验证结果表明,试纸条操作简单,肉眼于10min内可判定结果,对H9亚型禽流感病毒及其标准血凝抗原具有高度特异性,与其它亚型禽流感病毒标准抗原及其它禽类病毒没有交叉反应,检测灵敏度比HA试验高4倍以上。试纸条在室温保存6个月、4℃保存12个月,其特异性及灵敏度没有明显变化。对实验室送检及临床采集的共311份喉头拭子进行检测,结果与本室研制的禽流感ELISA试剂盒总符合率为92％,随机选取10份阳性样品经病毒分离证实无一误检。结果证明,本研究建立的H9亚型禽流感病毒免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合用于H9亚型禽流感病毒的现场检测及鉴别诊断。