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一步法RT-PCR和两步法RT-PCR对马铃薯病毒诊断研究的比较 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究采用试剂盒和Total试剂两种方法从马铃薯叶片和茎秆中提取总RNA,同时设计了一步法RT-PCR和两步法RT-PCR的反应体系,依据马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯S病毒、马铃薯A病毒以及马铃薯卷叶病毒的基因组RNA保守序列设计特异性引物对,并运用两种RT-PCR反应体系对染病的马铃薯进行病毒检测,结果与报道的这五种马铃薯病毒核苷酸序列进行BLAST比对, 表明扩增的五种马铃薯病毒靶带的序列与靶序列完全一致。两种诊断方法对马铃薯病毒核酸进行浓度检测,结果证明,两步法RT-PCR具有较高灵敏性。但这两种方法均可快速、简便、有效地诊断马铃薯病毒。 相似文献
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双重RT-PCR法快速检测多种马铃薯病毒的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
为建立快速、简便、灵敏度高、特异性强的RT-PCR检测马铃薯病毒技术,依据马铃薯X病毒、马铃薯S病毒、马铃薯A病毒以及马铃薯卷叶病毒的基因组RNA保守序列设计特异性引物对,从反转录和PCR等方面优化双重RT-PCR反应条件,同步扩增出上述四4种病毒,分别得到620(PVX)、435(PVS)、300(PVA)、222 bp(PLRV)大小的扩增片段。结果表明,反转录反应中引物浓度比例、dNTPs浓度和PCR反应中Mg2+浓度对双重RT-PCR检测多种马铃薯病毒的影响较大。优化的双重RT-PCR反应体系可以同步快速检测田间自然感染的马铃薯病毒,此方法还适合检测马铃薯脱毒种薯及试管苗,对马铃薯病毒病早期监测有一定的作用。 相似文献
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三重RT-PCR快速检测多种马铃薯病毒的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
依据马铃薯X病毒、S病毒、A病毒及卷叶病毒的基因组RNA保守序列设计特异性引物对,从反转录反应中dNTPs浓度、退火温度、PCR反应中Mg2+浓度、循环条件4方面优化三重RT-PCR反应条件,可以同步扩增出上述4种病毒,分别得到620bp(PVX)、435 bp(PVS)、300 bp(PVA)、222 bp(PLRV)大小的扩增片段.结果表明,反转录反应中dNTPs浓度和PCR反应中Mg2+对整个反应的影响最大;其次是退火温度;循环条件对RT-PCR影响较小.优化的三重RT-PCR反应体系为马铃薯病毒的检测提供了一种快速、灵敏、简便的方法,对马铃薯病毒的早期检测和防治提供了有效手段. 相似文献
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