借助于色谱图判断色谱仪中出现的故障

最近,作者在色谱工作中遇到了一些实际问题,通过分析、查找、判断,最后解决了这些问题。现向同行作以简单介绍,以使大家在今后的工作中遇到同样或类似的情况,能够用来参考、借鉴。     

家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化

从 18周龄鸡卵巢组织中抽提总 RNA,使用六聚体随机引物反转录后 ,用鸡 L eptin(瘦素 )特异性引物扩增出鸡L eptin编码区第 5 2～ 4 6 0 bp的长度为 4 0 9bp的 c DNA片段。根据鸡 L eptin的 3′端第 4 6 0～ 4 92 bp序列设计了 3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物 ,并在最后 1条引物 3′端连接上 Eco R 切点 ;在以上用于反转录扩增的 5′端引物的 5′端连接一 Bam H 切点。用该 5′端引物分别与 3个 3′端引物配对 ,利用反转录扩增出的 4 0 9bp的L eptin c DNA片段作为第 1模板进行扩增 ,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增。经 3次扩增得到编码鸡 L ep-tin成熟肽的全长 4 5 1bp的 c DNA序列。将该 4 5 1bp的 L eptin c DNA序列经 Bam H 和 Eco R 双酶切后 ,克隆入表达质粒 p RSET A的 Bam H 和 Eco R 两酶切位点之间 ,构建成表达质粒 p L ep- SCAU。转化有重组表达质粒 p L ep-SCAU的大肠杆菌 BL 2 1(DE3)在 L B培养基中培养后 ,经 IPTG诱导表达出相对分子质量为 2 0 10 0的鸡 L eptin融合蛋白和少量 4 0 2 0 0的 L eptin融合蛋白。L eptin融合蛋白的表达在 IPTG浓度为 0 .0 5 mmol/ L 时达到最高 ,占总菌体蛋白的 32 .6 %。用 Ni- NTA凝胶从 7L 发酵培养菌裂解液中纯化出 180 m g左右     

贵州火龙果生态栽培管理技术(二)

<正>(上接本刊2019年第2期"贵州省火龙果生态栽培管理技术(一)")4火龙果种苗繁育技术4.1扦插枝条准备选择优质、无病虫害的健壮植株,采集棱宽1.5厘米以上、棱厚0.2厘米以上的色深、健壮枝条。将枝条截成20～30厘米茎段,将基部的三棱削成斜面,并露出1厘米左右的木质部,刀口处用灭菌灵粉或高锰酸钾消毒,放阴凉通风处晾3～5天扦插。扦     

贵州低热河谷地区西番莲的优质高效栽培技术

西番莲作为贵州省"十三五"主推精品水果之一,在贵州省果树产业助力脱贫攻坚中扮演重要角色。其特有的芳香气息与酸甜口感使之成为水果市场新宠。从适用范围、环境要求、常见繁殖方式及后期管理、栽培要点、主要病虫害防治、采收时期等方面介绍了贵州低热河谷地区西番莲的高效栽培技术。     

全球养猪业疾病形势日趋严峻

正对现代养猪业而言,疾病的暴发是常见的威胁,这需要严格的生物安全措施以及先进的科技手段。不仅在畜禽行业新闻中,在大众媒体中牲畜疾病问题的曝光率也越来越高。一些人畜共患疾病的曝光可能会引起民众恐慌,而另一些疾病对养猪户或地区经济也可能会造成灾难性影响。猪流行性腹泻在北美和欧洲的暴发都引起了生产者的恐慌。口蹄疫     

高职院校辅导员队伍现状及职业化建设方法研究

近些年来,我国高等职业院校发展迅猛,在很多方面取得了长足的发展。但我们还要看到,在一些方面还存在着这样那样的问题。高职院校辅导员是高职院校建设中的重要支撑力量,本文就高职院校辅导员队伍现状进行了简要的分析,并就其职业化建设方法给出了一定的思路。     

福建莆田老鹰尖省级自然保护区鸟兽多样性初步调查

老鹰尖省级自然保护区是戴云山脉与闽东近海平原地区的过渡区域,具有一定的边缘效应,为了解该保护区内鸟兽的物种多样性现状。于2019年6月—2022年10月,分别在老鹰尖及违平山两个片区,布设安装红外相机47台。累计相机日24 703个,有效独立照片共计9 233张,识别出17种兽类、12种鸟类,其中兽类分属5目11科,鸟类分属4目7科。相对多度指数RAI前3种兽类依次为小麂（Muntiacus reevesi）(29.36)、野猪（Sus scrofa）(23.40)、白腹巨鼠(Leopoldmys edwardsi)(18.78);鸟类依次为白鹇(Lophura nythemera)(35.02)、紫啸鸫(Myophonus caeruleus)(8.16)、黑领噪鹛(Garrulax pectoralis)(3.86)。国家Ⅱ级重点保护野生动物6种。红外相机的调查结果初步反映了当前戴云山脉东北部山地丘陵地区鸟兽资源状况,为进一步在该保护区开展生物多样性长期监测、林区管理和人兽冲突等研究提供了数据基础。     

江淮杂交中籼水稻品质性状基因型与播期互作的AMMI模型分析

为明确杂交中籼水稻在江淮地区种植的适宜播期,提高稻米品质,选用3个杂交中籼水稻品种(系)分5个播期,利用AMMI模型对其营养食味品质性状(糊化温度、胶稠度、直链淀粉含量、蛋白质含量)进行了稳定性和适应性分析。结果表明,糊化温度、胶稠度、直链淀粉含量、蛋白质含量4项指标在基因型间、播期间及基因型×播期互作间的方差均达到极显著水平,这4项指标的交互效应主成分值(IPCA)差异也达到显著水平;穗期(抽穗至成熟期)平均气温较高、累计日照时数长、气温日较差大,有利于杂交中籼水稻品质的提高;3个参试品种(系)营养食味品质稳定性表现为新两优6号两优1128丰两优4号,5个播期对杂交中籼水稻品质影响表现为4月20日5月10日5月20日4月30日5月30日。     

百香果品种‘紫香1号’果实糖、酸和维生素成分分析

为深入了解‘紫香1号’百香果成熟果实中的可溶性糖、有机酸和维生素组分及含量,采用高效液相色谱法测定各组分的含量。结果表明:‘紫香1号’百香果中的可溶性糖主要为葡萄糖、果糖和蔗糖,各糖分之间差异显著,其中蔗糖含量最高,达38.52mg/g,属蔗糖积累型;有机酸包括苹果酸、丙二酸、乳酸、柠檬酸和琥珀酸,各有机酸之间差异显著,以柠檬酸含量最高,达0.995 mg/g,属柠檬酸优势型;维生素包括维生素A、维生素B1、维生素C和维生素E,各种维生素之间差异达显著水平,其中维生素E含量最高,为430.61 mg/kg。可见,‘紫香1号’百香果含有丰富的可溶性糖、有机酸和维生素,具有较高的甜度和酸度值,故果实成熟时鲜食口感酸甜,风味浓郁。     

表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2重组鸡痘病毒的构建

含ＩＢＤＶ保护性抗原ＶＰ２的质粒,以ＳｐｈＩ消化,然后用Ｔ４噬菌体ＤＮＡ聚合酶将末端补平,产物纯化后再以ＳａｌＩ消化一次,经再次纯化后与ＳｍａＩ和ＳａｌＩ分步酶切的鸡痘病毒插入载体ｐＦＧ１１７５－１相连,使唤基因顺向插入到载体Ｐ７５启动子下游,得到含ＩＢＤ ＶＰ２基因的重组插入载体ｐＦＧ ＶＰ２。