茄子转录因子分子标记体系的建立与优化

为确保茄子转录因子分子标记反应结果的稳定性和重复性,根据辣椒WRKY转录因子设计引物,以茄子品系ETC3-02为试材,对影响茄子转录因子分子标记反应的重要因素进行初步研究,建立并优化茄子转录因子分子标记技术体系。优化的茄子转录因子分子标记体系在20μL的反应体系中：1.0×buffer,1.5mmol/L MgCl2,0.4mmol/L dNTPs,1.0UTaq DNA聚合酶,2.5μmol/L GIIF上游引物,1.0μmol/LWSR下游引物,DNA模板50ng。     

景天基于WRKY转录因子分子标记体系的初步建立

用CTAB法提取三七景天基因组DNA,根据已报道的辣椒WRKY的转录因子保守区域设计引物,对影响PCR扩增反应的主要因素进行初步研究,建立景天基于转录因子的分子标记技术体系。在20μl的反应体系中,dNTPs0.4mmol/L,DNA模板30ng。扩增程序为:94℃预变4min,反应前7个循环在94℃30s、60℃30s、72℃1min条件下进行,随后5个循环在94℃30s、60℃30s、72℃45s条件下进行,随后13个循环在94℃30s、48℃30s、72℃1min、94℃30s、40℃30s、72℃1min条件下进行,最后72℃延伸10min。     

茄子品种基于WRKY转录因子的指纹图谱构建及遗传相似性分析

应用WRKY转录因子分子标记构建34个茄子品种的指纹图谱及进行遗传相似性分析,筛选出5对多态性高的引物进行PCR扩增,结果显示,扩增多态性带663条,每对引物检测到多态性条带84～181条,平均为132条。对所得到的34个茄子品种的指纹图谱进行组合和综合分析,可以将供试的34个茄子品种区分开来。表明利用WRKY转录因子分子标记技术可以用以鉴定茄子种质资源。按照UPGMA法进行聚类,从分子水平上将供试品种大体分为5个类群,第一类群又可分为2个亚类群,WRKY转录因子分子标记分类与传统的以果形或果皮颜色单一形态学性状为基础的分类没有直接的相关性。