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用EcoR Ⅰ酶切伪狂犬病病毒疫苗株Tk-/gE-/LacZ 基因组,与含有猪2型圆环病毒(PCV2)ORF2基因的重组转移载体pIEORF2共转染IBRS-2细胞.收集病变细胞,经空斑纯化和PCR鉴定,获得了新的重组病毒Tk-/gE-/ORF2 .用Southern blot杂交证明该重组病毒构建正确,用间接免疫荧光法和Western blot证日月该重组病毒可表达PCV2的主要免疫原性蛋白Cap蛋白.重组病毒在IBRS-2细胞上连续传15代后,遗传稳定.该重组病毒在IBRS-2细胞上增殖滴度为10-7.1 TCID50/0.1mL,在鸡胚成纤维细胞上增殖滴度为10-4.8 TCID50/0.1mL,在Marc-145细胞上增殖滴度为10-6.8 TCID50/0.1mL. 相似文献
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猪圆环病毒1型ORF2基因的克隆与序列分析 总被引:5,自引:0,他引:5
参照Genbank上公开发表的PCV1全基因序列设计引物,以质粒pSK-PCV为模板扩增出PCV1-ORF2基因,插入pMD18-T载体,对筛选出的阳性质粒进行测序,将测序结果同Genbank上发表的PCV1基因序列相比较,同源性达97%,再与Genbank上发表的PCV2的ORF2基因序列相比较发现PCV1-ORF2和PCV2-ORF2的差异表现在两者在核苷酸序列的2个部位互相存在基因缺失现象。将推导出的PCV1-ORF2的氨基酸序列同PCV2-ORF2进行比较,发现二者在几个功能区相当保守,尤其是N-末端的核定位序列、N-糖基化位点以及酪氨酸磷酸化位点。 相似文献
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AIV H5N1亚型高免卵黄抗体的制备及理化特性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
应用禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫20周龄的高产来航蛋鸡,制备抗AIV H5N1高免卵黄抗体(IgY).在比较了3种缓冲液对IgY活性的影响后,确定采用水稀释法提取IgY.同时在模拟的胃肠内环境下对IgY的各种理化性质进行了试验.结果表明,纯化的IgY在pH 2.0和胃蛋白酶终浓度为1.5 mg/mL的环境下,以及在pH 8.0和胰蛋白酶终浓度为2.5 mg/mL的环境下,37℃作用1 h后其ELISA抗体效价均无明显下降;同时,热稳定性试验表明,IgY在60℃以下作用30 min,其ELISA抗体效价也无明显下降;中和试验测得IgY的中和效价为1:640,具有较好的中和H5N1亚型AIV的能力.以上结果表明,本试验所制备的抗禽流感H5N1亚型高免IgY具有较高的抗体效价和中和效价,同时还具有一定的耐蛋白酶消化的作用,可用于H5N1亚型禽流感的预防和治疗. 相似文献
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猪2型圆环病毒核酸疫苗免疫效应研究 总被引:9,自引:0,他引:9
PCR扩增PCV2 ORF2和BVP22基因。将ORF2基因克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+),构建了pCORF2作为核酸疫苗免疫小白鼠。同时将具有蛋白转导功能的BVP22基因分别克隆到ORF2基因的上游和下游,使二者融合表达,命名为pCORF2BVP22和pCBVP220RF2。分4组肌肉免疫BALB/c小白鼠,分别注射pCDNA3.1(+)、pCORF2、pCORF2BVP22和pCBVP220RF2,共免疫2次,间隔2周,分别于首免后2周和二免后4周采血,ELISA法检测体液抗体。同时为在体外验证ORF2和BVP22基因的真核表达,将ORF2和BVP22基因分别克隆入pEGFP-N1载体,构建了pNORF2和pNBVP22,转染Hela细胞后在荧光显微镜下观察到了ORF2和BVP22在体外的瞬时高效表达。结果显示,通过两次免疫后,各疫苗组均产生了针对ORF2的体液抗体,同时证明BVP22可增强核酸疫苗的免疫效果,其中以BVP22在ORF2上游效果更好。本研究为防制猪2型圆环病毒感染提供了较为理想的侯选疫苗。 相似文献
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本文利用15个中晚熟玉米品种的7个主要农艺性状对单株产量的表型值资料,经过简单相关分析和通径分析,探讨各个性状与单株产量的关系。看出穗位高及穗粗、行粒数、百粒重与单株产量呈显著、极显著正相关,但对产量贡献较大的是行粒数、百粒重和穗粗。以这几个因子作为选择目标直接选择,并兼顾对其他性状的选择,较易选育出高产品种。 相似文献
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抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 总被引:7,自引:2,他引:7
利用本室构建的质粒PGEX-ORF2特化BL21(DE3).经IPTG诱导表达.得到PCV2-ORF2的重组蛋白,经复性纯化后作为免疫原.采取常规免疫与体外脾脏免疫结合的方式免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0的骨髓瘤细胞融合.经间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选,获得了2株抗PCV2-ORF2蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞.分别命名为382F4和9C3132,其细胞培养上清效价分别为1:1024、1:512,小鼠暖水效价分别为1:204800、1:102400。ELISA结果显示,382F4和9C3D2仅与融合表达的PCV2-ORF2蛋白反应,而与PGEX-KG表达的蛋白、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不反应.说明此2株单抗特异性好。间接免疫荧光结果显示.382F4和9C3D2能与PCV2发生反应,而不与PCV1发生交叉反应.表明所获得的2株单抗是PCV2型特异性的。这2株单抗的获得为进一步研究PCV2-ORF2基因的功能.及建立准确快速的鉴别PCV1和PCV2的诊断方法提供了强有力的手段。 相似文献
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共表达与牛疱疹病毒1型VP22融合的猪繁殖与呼吸综合征病毒E及M蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其免疫原性观察 总被引:4,自引:0,他引:4
为了研制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因工程疫苗,以伪狂犬病毒(PRV)gE基因缺失标志疫苗株TK^-/gE^-/LacZ^+为病毒载体,通过同源重组,构建了共表达与牛疱疹病毒1型VP22(BHV-1 VP22)融合的PRRSV E及M蛋白的重组伪狂犬病毒(rPRV)TK^-/gE^-/VP22E^+/VP22M^+。经PCR、Southern blot、Western blot证实rPRV构建正确,并能表达与BHV-1 VP22融合的PRRSV E及M蛋白。rPRV在IBRS-2、PK-15细胞中的增殖滴度与PRV亲本株相比无显著差异,表明外源基因的插入不影响rPRV增殖。用该rPRV免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠抗PRRSV中和抗体及脾淋巴细胞增殖反应,并与未融合VP22的单表达PRRSV E蛋白及共表达E及M蛋白的rPRV TK^-/gE^-/E^+与TK^-/gE^-/E^+/M^+进行比较。结果显示TK^-/gE^-/VP22E^+/VP22M^+可诱导小鼠产生更好的体液与细胞免疫反应,BHV-1 VP22发挥了佐剂效应。本研究为研制安全、有效的猪繁殖与呼吸综合征-伪狂犬病二价基因工程疫苗奠定了基础。 相似文献
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在泰安市水土保持监测站下港径流场,坡度为5°坡耕地上,设置4个径流小区,首次对该区域天然降雨条件下水土流失规律进行了初步研究。结果表明:鲁中低山丘陵区径流系数与降雨量存在y=ax+b线性相关关系,土壤侵蚀模数与降雨量、降雨强度存在y=a1(x1x2)a2幂函数关系,呈现出一定的相关性。等高耕作可以显著减少径流量和土壤流失量,增加降雨入渗。 相似文献
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