核酸疫苗研究进展(下)

Sato等报道，在质粒载体上引入大肠杆菌Amp^ 抗性基因(内含有6核苷酸片段的ISS免疫增强序列)，真皮免疫小鼠后ISS增强CTL和Th1细胞的免疫反应。有人提出利用含有病毒免疫原性基因的基因大片段进行基因免疫，以弥补单基因免疫活性的不足。将协同因子如IL-2、IL-12、TCA等的表达质粒与抗原表达质粒混合注射可使Th1型细胞免疫增强，而GMcsf能明显加强体液免疫，     

鸡胸腺肽的提取及其生物学活性的初步研究

采用两种不同的方法提取鸡胸腺肽,计算胸腺肽得率,鉴定和比较提取物的生物学活性。结果显示,两种方法的提取物在体外不仅能使脱E受体的淋巴细胞恢复其E受体的功能,并能促进体外培养的淋巴细胞增殖;而且能增强鸡的淋巴细胞增殖能力,增加鸡外周血中γ-干扰素的含量。除了E玫瑰花环实验,各项体内外的活性检测均显示第二批鸡胸腺肽具有较高的活性,并且与购买的人用胸腺肽相当。本研究的结果表明,提取方法二操作简便,产率高,其提取物生物学活性较高,可用于兽医临床研究。     

我国鸡传染性支气管炎病毒地方性流行毒株S1基因的RT-PCR扩增及其克隆与鉴定

采用ＲＴ－ＰＣＲ方法,以ＩＢＶＳ１全基因特异性引物分别从我国华东（ＨＤ）、华北（ＨＢ）、华中（ＨＺ）、华南（ＨＮ）、西北（ＸＢ）及东北（ＤＢ）等地的ＩＢＶ流行株基因组中扩增出预期的１．７ｋｂ左右的ＤＮＡ片段。ＰＣＲ产物的ＨａｅＩＩ酶切分析及其与英国ＩＢＶＳ１全基因核酸探针的分子杂交证实所获６个ＩＢＶ流行株的ＰＣＲ产物为ＩＢＶＳ１基因。将此６个毒株的Ｓ１基因ＰＣＲ产物分别进行５’和３’端的ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄＩＩ酶切识别位点的分子修饰之后插入到克隆质粒ｐＵＣ１８的ＢａｍＨＩ／ＨｉｎｄＩＩ位点,在大肠杆菌中实现了目的基因的分子克隆。Ｓ１基因的ＲＦＬＰ分析表明我国ＩＢＶ已有分子水平的变异。     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因免疫对鸡的保护作用

将鸡传染性支气管炎病毒肾型 Ｔ 株 Ｓ１ 基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ 连接于ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 的 Ｈｉｎｄ Ｉ Ｉ Ｉ与 Ｂａ ｍ Ｈ Ｉ位点之间构建含有 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子及 Ｂ Ｇ Ｈｐｏｌｙ Ａ 信号序列的鸡传染性支气管炎病毒 Ｓ１ 蛋白真核表达质粒。实验证明, Ｓ Ｐ Ｆ 鸡肌注免疫后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体逐渐升高,至第３５ 日龄左右达到高峰,攻毒后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体先下降而后升高,血清 Ｉｇ Ｇ 抗体升高幅度不及 Ｉ Ｂ 油苗免疫组。质粒 Ｄ Ｎ Ａ 免疫鸡攻毒后有４０ ％ 的鸡可耐过强毒的攻击,说明 Ｓ１ 基因在体内获得了表达并使鸡产生了一定的免疫力。     

Immunoadjuvant effects of bacterial genomic DNA and CpG oligodeoxynucleotides on avian influenza virus subtype H5N1 inactivated oil emulsion vaccine in chicken

This study investigated the immunoadjuvant effects of three types of bacterial genomic DNA and CpG oligonucleotides (CpG ODN) on the avian influenza virus (AIV) subtype H5N1 inactivated oil emulsion vaccine under two immunization strategies. The genomic DNA extracted from Escherichia coli O₂, Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis FQ68, and synthetic CpG ODN were used as adjuvants, and their effects on the AIV oil emulsion vaccine were examined in chickens. The results indicated that when administered separately from the vaccine, adjuvants induced lower haemagglutination inhibition (HI) titres and serum IgG titres but resulted in higher concentrations of IFN-γ and IL-10. In contrast, when combined with the oil emulsion vaccine prior to inoculation, CpG ODN induced higher HI, IgG titres and IFN-γ concentration but resulted in lower IL-10 concentration. These data suggest that, depending on the immunization approaches, adjuvants may exert distinct immune effects in chickens receiving AIV H5N1 oil emulsion vaccine: the prior incorporation of CpG ODN into the vaccine may augment both the humoral and Th1 type immune responses, while separate inoculation of adjuvants has not shown better adjuvanticity.     

复方中药发酵液对肉鸡大肠杆菌病的防治效果及免疫调节作用

试验旨在研究复方中药发酵液对肉鸡大肠杆菌病的防治效果及免疫调节作用。选择健康1日龄AA白羽肉鸡240羽,分别进行大肠杆菌O78半数致死剂量和复方中药发酵液对大肠杆菌病的防治试验。在28日龄评价治疗效果,并在28、42日龄分别检测免疫器官指数、抗氧化指标和肠道菌群等指标。结果显示,经过植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌等菌株发酵后的复方中药发酵液能够将大肠杆菌的感染时间由4 h延迟至24 h,高剂量组（1.0 g/mL）、中剂量组（0.5 g/mL）、抗生素组（硫酸新霉素）有效率分别为80.0%、76.7%和80.0%,治愈率分别为80.0%、70.0%和70.0%;高剂量组与感染组和抗生素组相比,28日龄时胸腺指数分别提高了165.6%（P<0.05）、25.4%（P>0.05）,法氏囊指数分别提高了82.6%和94.3%（P<0.05）,42日龄时胸腺指数分别提高了97.4%和82.0%（P<0.05）,法氏囊指数分别提高了43.4%和27.5%（P<0.05）,28、42日龄时抗氧化指标T-AOC、TP含量及GSH-Px、T-SOD活性差异显著（P<0.05）,能够显著提高肠道内乳酸菌含量,降低大肠杆菌含量（P<0.05）。综上,中剂量组（0.5 g/mL）复方中药发酵液抗菌效果明显,能够替代抗生素,高剂量组（1.0 g/mL）复方中药发酵液对肉鸡其他指标明显优于抗生素。     

益生菌基因组DNA为疫苗佐剂对鸡免疫效果的影响

一次试验选用1株益生茵的基因组作为禽流感病毒(AIV)H5N1亚型灭活油乳苗的佐剂,设不同剂量,分口服和同位点注射佐剂、疫苗的途径免疫鸡群;二次试验扩大菌株类型,以5株益生菌的基因组作为佐剂同位点注射鸡群,定期检测特异性抗体水平.一次试验显示在所有检测时间点上,疫苗对照组的抗体效价高于(P》0.05)或者显著高于(P《0.05)益生菌基因组的,且注射佐剂组的抗体效价高于口服佐剂的效价;二次试验显示疫苗对照组的抗体效价在前期高于(P》0.05)或者显著高于(P《0.05)益生茵基因组的效价,后期略低于某些益生菌组的(P》0.05),且各种益生菌基因组不同程度的推迟了抗体高峰期.     

IBV地方分离株致病原性和血清学分型的比较

将６株分离自国内不同地方的ＩＢＶ流行株分别感梁ＳＰＦ鸡，对气管和肾桩进行系统病理观察，发现６株ＩＢＶ在至于致病原性和组织嗜性上存在显著差异，其中ＱＤ可引起严重的呼吸道损伤，并伴有相对较轻的肾脏损伤，其余５株对肾脏损伤较为严重地呼吸道损伤相对温和。用气管环组织培养交叉中和实验（ＳＮ）和ＳＡＳ软件对６株分离毒进行血清学分型研究，结果显示ＱＤ株属于Ｍ型，ＺＺ、ＧＺ属于Ｔ型，而ＴＪ、ＤＬ和ＹＣ株是不同于Ｍ     

鸡传染性支气管炎二价灭活苗的研制

从上海、江苏、大连等地的患病鸡群中分离到８株病毒，经鉴定确认为鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）。从中挑选出２株具代表性毒株（Ｃ９００１、ＤＬＺ９１１１）研制出二价油佐剂灭活苗。结果表明，１∶１００稀释的二价油佐剂灭活苗最小免疫剂量０．５ｍｌ／只，一次免疫对支气管炎型ＩＢ的保护率可达６６．６７％，对肾型ＩＢ的保护率可达８３．３３％。０．２ｍｌ的二价苗免疫１５日龄的雏鸡，１５ｄ后攻毒，对肾型ＩＢ的保护率达１００％，而肾型和支气管炎型单价苗的免疫保护率分别为９０％和８０％。通过实验室的免疫试验和临床应用，证明安全高效。     

斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒及抗体

采用鼠抗鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）高免血请作第１抗体，利用酶标羊抗鼠ＩｇＧ作第２抗体，建立间接法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测ＩＢＶ抗原；利用鸡抗ＩＢＶ血清阻断试验检测ＩＢＶ抗体。试验表明，本程序检测ＩＢＶ抗原及其抗体具有高度过感性和特异性。最低抗原检出量达１０￣（－８）ｇ数量级，阳性检出率９８％，阳性阻断率１００％。