MCU在低氧诱导肉鸡心肌细胞线粒体损伤中的作用

旨在探讨线粒体钙单向转运体（mitochondrial calcium uniporter,MCU）介导线粒体Ca²⁺转运是否参与低氧诱导的肉鸡心肌细胞线粒体损伤。试验通过分离白羽肉鸡鸡胚原代心肌细胞,在低氧条件下（3% O₂,5% CO₂,92% N₂）培养24、48、72 h,同时使用RU360抑制MCU的表达并在低氧条件下处理72 h后,使用流式细胞术检测细胞内Ca²⁺浓度、线粒体Ca²⁺浓度、线粒体活性氧水平和线粒体膜电位,检测MCU及其调节因子的mRNA和蛋白表达。结果显示,通过差速贴壁方法培养的心肌细胞纯度可达90%以上;低氧培养24 h,诱导心肌细胞MCU、MICU1 mRNA表达增加（P<0.05）,胞浆和线粒体内Ca²⁺浓度显著上升（P<0.05）,线粒体膜电位增加（P<0.05）;低氧培养48 h,诱导MCUR1和MICU1 mRNA表达减少（P<0.05）,细胞Ca²⁺浓度上升（P<0.05）;低氧培养72 h,诱导MCU mRNA表达增加（P<0.01）,细胞和线粒体内Ca²⁺增加（P<0.01）,线粒体膜电位下降（P<0.01）,活性氧增加（P<0.01）。低氧处理72 h后,与低氧组相比,RU360预处理组细胞和线粒体内Ca²⁺减少,线粒体膜电位上升,活性氧生成减少（P<0.01）,MCU mRNA表达减少（P<0.01）。结果表明：低氧诱导MCU上调导致线粒体钙超载,促使线粒体功能降低并发生损伤,进而心肌细胞发生损伤;抑制MCU表达可以减轻低氧诱导的心肌细胞线粒体钙超载,保护线粒体。     

高铜日粮对肉鸡肾氧化损伤和Nrf2信号通路相关基因表达的影响

为了研究高铜日粮对肉鸡肾氧化损伤和Nrf2信号通路相关基因表达的影响,选用48只1日龄健康白羽肉鸡,随机分为4组,每组12只,分别喂以基础日粮(Cu 11 mg·kg~(-1),对照组)和高铜日粮(Cu 110 mg·kg~(-1),高铜Ⅰ组;Cu 220 mg·kg~(-1),高铜Ⅱ组;Cu 330 mg·kg~(-1),高铜Ⅲ组),并于49日龄采集肾组织作为样品,制作组织切片观察肾病理变化,检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽还原酶(GR)和总抗氧化能力(T-AOC)等指标的变化,并通过实时荧光定量PCR检测核转录相关因子2(Nrf2)、谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)、谷氨酰半胱氨酸合成酶修饰亚基(GCLM)、血红素氧化酶(HO-1)、NAD(P)H醌氧化还原酶1(NQO1)的mRNA相对转录量。结果显示,高铜组肉鸡的肾间质变宽,肾小管上皮细胞出现脱落;高铜Ⅲ组肾的T-AOC、SOD和GR活性与对照组相比显著下降;MDA含量无显著变化;高铜Ⅱ组和高铜Ⅲ组Nrf2和GCLC mRNA相对转录量与对照组相比显著升高,高铜组GCLM和HO-1 mRNA相对转录量与对照组相比显著上调,而NQO1 mRNA的相对转录量则无显著变化。结果表明,高铜日粮可诱导肉鸡肾发生氧化损伤和Nrf2信号通路相关基因的表达。