慢性心阳虚大鼠模型制备改良研究

[目的]对现有慢性心阳虚大鼠模型加以改良,制备更符合中(兽)医证候特点的心阳虚动物模型,为温阳方剂的作用机理研究积累资料.[方法]以盐酸多柔比星(主要成分为阿霉素)诱导法联合冰水浴寒冷刺激制备慢性心阳虚大鼠模型,耳温枪测量耳洞温度,生化分析仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)四种心肌酶活性,ELISA法测定血浆脑利钠肽(BNP)含量,多道生理信号采集处理系统监测心电图和心率变化,常规方法制作心脏切片并观察心肌病理学变化.[结果]与对照组相比,制备的慢性心阳虚模型大鼠出现精神萎靡、活动减少、身体蜷缩和扎堆等阳虚症状,且体温在造模后期的第28、35和42天明显降低(P＜0.01);在造模第42天,心肌酶ALT、AST、CK、LDH活性显著升高(P＜0.05/P＜0.01),血浆BNP含量显著升高(P＜0.05);心电图QRS间期在14、21和35天显著延长(P＜0.05/P＜0.01),ST段在第35、42天明显抬高(P＜0.01),心率在14、21、28、35和42天明显降低(P＜0.05/P＜0.01);心肌组织出现空泡变性、心肌变性及轻度单个核细胞浸润.[结论]改良的盐酸多柔比星联合冰水浴寒冷刺激法可制备出具有阳虚症状和心脏损伤特征的慢性心阳虚大鼠模型,造模成功率提高.     

重组绵羊pEGFP-PRNP质粒构建及真核细胞转染

构建了携带绵羊朊蛋白基因（PRNP）的重组真核转染质粒,通过脂质体转染试剂将其转染至神经胶质瘤细胞（C6）,以期为进一步研究绵羊朊蛋白的生理功能和从细胞水平研究朊蛋白疾病的发病机制奠定基础。采用PCR扩增目的基因序列,纯化后将其克隆到带有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的真核表达载体pEGFP-N1中,对重组质粒pEGFP-PRNP做酶切鉴定。而后采用阳离子脂质体转染法将重组质粒转染到C6细胞,荧光显微镜观察。经鉴定,绵羊PRNP基因已克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,成功地构建了重组pEGFP-PRNP质粒,并可稳定地在C6细胞中表达。本研究为外源朊蛋白在细胞中表达提供了平台,为进一步在细胞水平研究朊病毒疾病奠定了基础。     

金黄地鼠（Mesocricetus auratus）朊蛋白基因的克隆及其原核表达

采用RT-PCR技术从金黄地鼠(Mesocricetus auratus)脑组织获得朊蛋白基因(Prion protein nucleic acid,PRNP)开放阅读框(Open reading frame,ORF),截去其N端信号肽(66 bp)和C端GPI锚定位点(69 bp)形成朊蛋白编码区PRNPx;将编码区重组于融合表达质粒Pet-DsbA中,并在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中经IPTG诱导表达,并经Western-blot验证。结果表明,金黄地鼠PRNP基因ORF区全长为765 bp,编码254个氨基酸的前体蛋白,核苷酸序列与已发表金黄地鼠序列(M14054)同源性为99.87%,其第116个氨基酸发生了同义突变由GCT变为GCC;朊蛋白在大肠杆菌得到高效表达,产物是相对分子质量为47 000的融合蛋白。     

羊附红细胞体病血清NO及红细胞免疫功能与头翁四君子汤作用研究

附红细胞体病(Eperythrozoonosis)是由附红细胞体(Eperythrozoon)引起的一种人畜共患传染病。此病最早报道于1928年，由Schilling和Dinger分别在啮齿类动物中发现球状附红细胞体。我国于1981年由晋希民首先在家兔中发现附红细胞体。该病主要呈隐性感染，平均隐性感染率可达86．53％，能造成家畜体质衰弱，繁殖能力下降，乳、肉产量减少，     

贝那普利对心阳虚模型大鼠心功能相关指标的影响

[目的]旨在研究贝那普利对心阳虚模型大鼠心电图ST段、心率、心肌酶以及心肌组织病理学的作用,为其在临床上对心阳虚证的治疗提供参考.[方法]以阿霉素联合冰水浴冷刺激法制作心阳虚大鼠模型,采用多道生理信号采集处理系统监测心电图、心率变化,并以生化分析仪检测心肌酶活性,常规方法制作心脏切片并观察其组织病理学变化.[结果]模型组大鼠出现虚寒症状,心电图ST段在第35、42天明显抬高(P＜0.01),心率从14天开始明显降低(P＜0.05/P ＜0.01),心肌酶LDH、CK、ALT、AST活性显著升高(P＜0.05/P＜0.01),心肌细胞出现空泡变性、心肌变性和轻度单个核细胞浸润.贝那普利组大鼠虚寒症状好转,心电图ST段在第7、14、35、42天明显回落(P＜0.05/P＜0.01),心率在第14、35天显著增加(P＜0.01),心肌酶LDH、CK、ALT、AST活性显著降低(P＜0.05/P＜0.01),心脏仅见极轻度单个核细胞浸润.[结论]贝那普利通过降低心电图ST段异常升高、增加心率、降低心肌酶活性、改善心肌损伤程度减轻心阳虚模型大鼠虚寒症状,对其具有良好的预防和保护作用.     

蝇蛆粉及蝇蛆培养残料对夏季产蛋鸡血液生化指标的影响

家蝇幼虫——蝇蛆的营养价值极高,含有动物需要的多种氨基酸。近年来,许多从事畜牧工作的专家学者致力于昆虫饲料蛋白的研究和开发,主要是关于蝇蛆的饲养、蝇蛆及蝇蛆粉营养成分的分析和蝇蛆及     

大鼠大脑皮质神经元的分离及培养

为了给更好地研究神经元病理变化提供物质材料,对新生大鼠大脑皮质神经元进行体外分离和培养。无菌操作取新生大鼠的大脑皮质,采用机械法和胰蛋白酶消化法相结合的方法分离细胞,制备单层细胞悬液接种培养板;5-氟脱氧尿嘧啶处理等方法纯化神经元,甲苯胺蓝染色法及抗NSE单克隆抗体对纯化后的神经元进行鉴定。结果表明,培养的神经元生长良好,形态正常,纯度高达90%以上。采用本方法培养的神经元可作为深入研究中枢系统疾病的细胞模型材料。     

绵羊PRND基因序列分析

Doppel是一种新发现的朊蛋白样糖蛋白,与PrP相类似,编码Dpl蛋白的基因称作PRND,鼠、人,以及其他哺乳动物的PRND位于PRNP下游16 kb的地方[1].Dpl与PrPC(cellular prion pro-tein)C端的三分之二具有25%的序列同源性;Dpl与PrP在二级结构和拓扑学上具有极大的相似性,均包含3个α螺旋和2个二硫键,但是在N端Dpl则缺乏存在于PrPC中八肽重复区域[2-4].     

"头翁四君子汤"对羊附红细胞体病血清SOD、MDA含量的影响

选用附红细胞体患病羊和健康羊,于用药前1天,用药后第1天、第4天、第7天分别自颈静脉采血,分离血清,用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,探讨羊患附红细胞体病后血清SOD、MDA的变化及中药对其调节作用.结果表明,羊患附红细胞体病后,血清SOD活性降低,MDA含量显著升高;而"头翁四君子汤"能显著提高SOD的活性,明显降低MDA含量,从而保护机体免受自由基损伤.