版纳微型猪近交系AURKC的分子特征及其在睾丸中的转录调控研究

为研究AURKC基因在版纳微型猪近交系（Banna mini-pig inbred line, BMI）精子发生中的功能特性及表达调控,本研究利用RNA-seq技术对BMI 12月龄成年公猪的睾丸进行全转录组测序;采用RT-PCR技术从BMI睾丸获得AURKC全长编码序列,并分析其分子结构、蛋白保守结构域及功能特性,构建多物种氨基酸序列进化树和蛋白互作网络图;利用睾丸全转录组测序数据,借助相关数据库,对AURKC基因进行功能注释,预测调控的ceRNA(competing endogenous RNA,竞争性内源RNA),并构建转录调控网络。结果表明：AURKC在BMI睾丸中原始平均表达量为721.25,其对应转录本ENSSSCT00000051895.2的平均表达量（TPM）值为18.37,该基因CDS长894 bp(GenBank登录号：OK042305),编码297个氨基酸,位于猪6号染色体,含7个外显子;氨基酸序列N端亲水,C端疏水,含269个氨基酸组成的结构域S＿TKC,二级结构中无规则卷曲占比最大;进化分析表明,AURKC氨基酸序列在哺乳动物多物种间具有高度的保守性及进化同源...     

大麦-小麦无抗型日粮添加壳聚糖和非淀粉多糖酶对肉鸡生长性能和盲肠微生物组成的影响

试验旨在研究大麦—小麦无抗型日粮中添加壳聚糖(CTS)和非淀粉多糖(NSP)酶对1~42 d肉鸡生长性能、空肠组织结构和盲肠微生物组成的影响。选择720羽1 d ROSS 308商品代肉仔鸡,随机分为4组,每组6个重复(30羽/重复),对照组饲喂以大麦—小麦为主的基础日粮,CTS组、NSP酶组和CTS+NSP酶组饲喂含300 mg/kg CTS、200 mg/kg NSP酶和150 mg/kg CTS+100 mg/kg NSP酶的日粮,试验期42 d。结果显示:CTS组、NSP酶组和CTS+NSP酶组较对照组显著提高了21 d、42 d肉鸡末重和1~21 d、1~42 d肉鸡平均日增重(P0.05)。CTS+NSP酶组较对照组、CTS组和NSP酶组显著降低22~42 d及1~42 d料重比。CTS组和CTS+NSP酶组1~42 d肉鸡胸腺指数显著高于对照组和NSP酶组(P0.05)。日粮添加CTS+NSP酶较其他各组显著降低了空肠隐窝深度(P0.05),显著提高了空肠绒毛高度与隐窝深度比值(P0.05)。NSP酶组或CTS+NSP酶较对照组和CTS组显著提高了盲肠乳酸杆菌含量(P0.05),与对照组相比,CTS组、NSP酶组或CTS+NSP酶组均显著降低了盲肠大肠杆菌数量(P0.05)。综合考虑,本试验中150 mg/kg CTS+100 mg/kg NSP酶应用效果最佳。     

菌肥灌根对草地早熟禾的生长与抗病诱导作用初探

生物肥料具有促生和控病双重效果,在生产中发挥着巨大作用。为研发一种新的生物肥料,调查了单施极可善+倍绿草肥、单施拮抗菌CE发酵液和混施菌肥（极可善+倍绿草肥+拮抗菌CE发酵液）3种不同施肥处理对草地早熟禾（Poa pratensis）腐霉枯萎病（Pythium graminicola）发病面积、发病程度以及草地早熟禾叶片宽度的影响,并测定不同施肥处理对草地早熟禾体内防御酶活性的变化。结果表明,单施拮抗细菌对抗病性诱导效果最佳,草地早熟禾体内各种防御酶活性均有不同程度的提高;单施极可善和倍绿草肥具有较好的促生作用,草地早熟禾叶片宽度高于其他处理;而菌肥混施虽然也有较好的抗病性的诱导作用,但没表现出促生作用。     

猪类无精症缺失基因DAZL的cDNA全长克隆、组织表达和亚细胞定位

旨在获得猪类无精症缺失基因DAZL cDNA全长序列,阐明该基因的序列、mRNA组织表达模式、蛋白质结构特征及亚细胞定位情况。本研究以版纳微型猪近交系（Banna mini-pig inbred line,BMI）10月龄成年公猪为研究对象,屠宰收集组织样,利用RACE和RT-PCR技术获得DAZL基因cDNA全长序列;使用实时荧光定量PCR （qPCR）技术检测其mRNA多组织表达谱;在线分析蛋白质的结构特点和保守结构域;用体外细胞转染技术鉴定其在ST猪睾丸细胞中的定位。结果表明,BMI DAZL cDNA全长2 985 bp （KU705632）,包含888 bp的CDS区,编码295个氨基酸（AOC89050）;该基因位于猪13号染色体,含11个外显子。qPCR结果显示,DAZL mRNA在睾丸中特异高表达。生物信息学分析表明,猪DAZL蛋白含有哺乳动物RMP和DAZ同源区,无规则卷曲在二级结构中超过50%。进化分析表明,BMI DAZL氨基酸序列高度保守,与牛科的亲缘关系最为接近。pEGFP-C1-DAZL转染ST细胞后的荧光共定位结果显示,DAZL蛋白主要分布在细胞核中。本研究分别从DNA、mRNA和蛋白质层面阐明了BMI DAZL基因的序列特征、表达、蛋白质结构和定位,为进一步研究DAZL在BMI精子发生方面的功能奠定基础。     

D-乳酸大肠杆菌工程菌的驯化及其补料发酵研究

以前期构建的D-乳酸大肠杆菌(Escherichia coli)工程菌LHY02为出发菌株,通过在乳酸盐中对菌株进行驯化的方式来解除乳酸根对菌体的抑制作用;采用葡萄糖分批补加方式缓解高含量葡萄糖的阻遏效应,拟进一步提高大肠杆菌发酵产D-乳酸的产量、生产强度和糖酸转化率。结果表明,驯化后的菌株LHY201在16%的葡萄糖发酵中D-乳酸产量比驯化前提高了36.7%。LHY201结合葡萄糖进行补料发酵(补料方式为8%+8%+4%),乳酸产量、发酵时间、糖酸转化率以及生产强度分别为185.7 g/L、48 h、93.8%、3.87 g/L/h,D-乳酸光学纯度达到99.6%,相比一次性添加20%葡萄糖的分批发酵,乳酸产量和糖酸转化率分别提高了21.1%和21.2%,发酵周期缩短了一半。     

版纳微型猪近交系精子发生相关基因PHF7的分子特征及转录调控研究

[目的]获得版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)精子发生相关基因PHF7的分子特征,构建其转录调控网络.[方法]通过RNA-seq技术对BMI睾丸进行全转录组测序;利用RT-PCR技术从BMI睾丸分离PHF7全长编码序列并分析其分子特征和蛋白功能;进一步基于睾丸全转录组测序数...     

猪精子发生候选基因PYGO2的分离、表达和亚细胞定位研究

旨在分离猪PYGO2编码区序列，获悉该基因mRNA组织表达模式、蛋白质结构特征、细胞中的分布和定位，并构建蛋白相互作用网络。本研究首先利用RT-PCR从成年版纳微型猪近交系（BMI）睾丸组织中克隆PYGO2编码区序列；利用生物信息学解析其基因结构并对蛋白质进行多种功能分析，比较多个哺乳动物PYGO2的氨基酸序列同源性，构建系统进化树和蛋白质相互作用网络；然后利用qPCR技术检测PYGO2在15个组织中的mRNA表达情况；最后通过构建pEGFP-C1-PYGO2融合表达载体，转染猪睾丸细胞（ST），确定PYGO2的亚细胞定位。结果表明，PYGO2基因CDS长1 221 bp，编码406个氨基酸（基因和氨基酸号分别为KY644518和AVB77243.1），定位在猪4号染色体；PYGO2蛋白二级结构以无规则卷曲为主，N端和C端均疏水；氨基酸序列同源比对分析表明，猪PYGO2与其他哺乳动物的相似度均大于97%，在进化上高度保守；蛋白互作网络分析显示，猪PYGO2与9个蛋白可能存在相互作用，其中与BCL9蛋白作用最为紧密；qPCR表达分析表明，猪PYGO2在被检的15个组织中均有不同程度表达，在生殖腺中表达相对较高；ST细胞中的亚细胞定位结果表明，PYGO2 mRNA主要分布在细胞核。本研究获得了PYGO2基因的编码序列，蛋白质结构和定位，蛋白质相互作用网络，mRNA多组织表达特征，可为进一步解析该基因在猪精子生成中的分子机制提供参考。     

桃树根际拮抗细菌CE抑菌物质对桃褐腐病菌的抑制作用和稳定性研究

为了进一步了解拮抗细菌CE的抑菌作用机理,采用了膜透性试验、抑菌试验、电镜观察、孢子萌发和离体接种等方法进行了研究.结果显示,拮抗细菌CE抑菌物质能引起桃褐腐病菌菌丝细胞膜透性变化,导致电解质外渗和培养液电导率增加;致使菌丝和分生孢子形态异常,细胞内液泡增多,分生孢子不能萌发;并对桃褐腐病菌的侵染和病情的发展有明显的抑...     

红酵母利用玉米浆发酵产富含类胡萝卜素功能饲料的研究

研究旨在对红酵母D(Rhodotorula sp.D)利用玉米浆发酵生产含类胡萝卜素功能饲料的培养基的碳氮源进行优化,并进行工业化生产试验。对玉米浆和葡萄糖结晶废糖液分别进行单因素试验来确定最佳碳氮源比例,进行7 L发酵罐试验确定上罐参数,1 000 L发酵罐中试并对发酵液进行喷雾干燥制取产品。结果表明葡萄糖结晶废糖液和玉米浆的添加量分别为7%和33.3%,7 L发酵罐最佳发酵时间为72 h,此时的生物量、色素含量和色素产量分别达到30.2 g/l,374.1μg/g和11.3 mg/l;1 000 L最佳发酵时间为41 h,此时的菌体生物量,色素含量,色素产量分别为42 g/l,404.6μg/g,17 mg/l。喷雾干燥后的产品粗蛋白质含量达到31%,类胡萝卜素含量为180.4μg/g。结果表示,优化培养基组分,控制好发酵条件,就可以利用玉米浆发酵生产富含类胡萝卜素红酵母增色功能饲料。