非洲猪瘟疫苗研究进展

非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）引起的家猪和野猪的急性、出血性传染病,强毒株感染猪的致死率接近100%,给养猪业造成巨大经济损失。ASFV在猪群中可以快速有效传播,在环境中可稳定存在,为ASF的防控带来了挑战。研究人员一直致力于ASF疫苗的研究,迄今为止,仍没有有效的疫苗投入市场。综述了ASF灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗、病毒活载体疫苗的研究情况,以期为ASF疫苗的有效研发提供参考。     

羊免疫布鲁菌病疫苗(S2株)免疫抗体长期监测结果的试验

为探究羊经布鲁菌病疫苗(S2株)免疫后的血清抗体长期动态消长规律,本试验于2012年9月-2015年9月选取阿拉善盟阿拉善左旗96只山羊、100只绵羊作为试验动物,经布鲁菌疫苗(S2株)100亿CFU、200亿CFU不同免疫剂量灌服,分别于免疫前和免疫后不同时间段采血分离血清,应用虎红平板凝集试验和试管凝集试验进行抗体监测。结果表明,绵羊组在一免后20d时,血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,150d抗体阳性率降至0%,免疫后180d^360d,绵羊组抗体阳性率一直处于较低水平(0%~4%),二免和三免后不同时间段免疫抗体消长规律与首次免疫基本一致;山羊组抗体阳性率在免疫后20 d时,血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,免疫后90 d^360 d,免疫抗体时高时低,起伏较大,无明显规律,二免和三免后不同时间段免疫抗体消长规律与首次免疫基本一致,结果同时表明,100亿CFU和200亿CFU两个免疫剂量组的抗体阳性率无明显差异。     

大肠杆菌分离鉴定及其耐药性试验

为了确定采集自内蒙古地区某牧场的病料内的病原菌,对其进行细菌的分离培养。将分离培养出的2株病原菌进行16S rDNA扩增、细菌生化鉴定、致病性试验以及细菌耐药性试验。结果表明,分离菌在伊红美蓝琼脂培养基上可生长出暗红色或黑色并且带有金属光泽的菌落;镜检可见,分离菌为革兰阴性杆菌;分离菌生化鉴定结果与大肠杆菌标准菌株ATCC 25922测定的结果相一致;分离菌的16S rDNA与大肠杆菌标准菌株16S rDNA PCR扩增结果相一致;分离到的2株大肠杆菌均具有致病性,对多种抗生素均有耐药性。结果提示,该次分离得到的病原菌主要为具有多重耐药性的致病性大肠杆菌。     

布鲁氏菌病疫苗（S2株）免疫羊抗体消长规律的研究

为探讨羊经布鲁氏菌病疫苗免疫后的血清抗体消长规律,本研究分别对绵羊和山羊进行布鲁氏菌S2株疫苗不同剂量的灌服,于免疫前和免疫后不同时间采集血清样品,采用虎红平板凝集试验和试管凝集试验进行血清抗体检测。结果表明,绵羊及山羊均在免疫后20d时血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,免疫后90天降至低点。免疫后90至360d,绵羊组抗体阳性率几乎一直维持在14%以下,各时段无显著性差异(P>0.05);山羊组抗体阳性率在免疫后90至360d期间时高时低,起伏较大,无明显规律。试验期间,山羊的抗体阳性率普遍高于绵羊,且降升幅度较大。同时,研究表明,同种羊100亿和200亿两个免疫剂量组的抗体阳性率差异不大。     

小反刍兽疫的诊断与综合防控措施

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性、亚急性传染性疾病,主要感染绵羊、山羊及一些野生小反刍动物,发病率和死亡率均较高,给广大农牧民和养殖场造成巨大的经济损失。因此,对该病的诊断及综合防控措施进行概述,以期为该病的防控提供参考。     

我国北部一淡水湖野生黑颈??死亡的原因调查

2015年5月14—15日,内蒙古自治区某淡水湖出现大量黑颈??死亡。5月21日,内蒙古自治区动物疫病预防控制中心组织相关专家赶赴现场,开展了紧急流行病学调查,分析黑颈??的死亡原因,评估该事件对当地家禽养殖的风险。调查结果显示:此次事件中的黑颈??死亡率约为46.2%,未发现有其他鸟类和家禽死亡;该淡水湖周围5 km范围内的其它地点未有禽类死亡,对该范围内的活野鸟和家禽进行抽样检测,未检出禽流感病原,但国家禽流感参考实验室从送检的死亡野鸟病料样品中均检出H5N1亚型高致病性禽流感病毒,并且检测发现该区域内家禽的H5亚型禽流感免疫抗体合格率较低;在野鸟向家禽传播疫病的7个风险因素中,家禽养殖方式、家禽免疫状况的风险程度较高。调查认为,本次黑颈??死亡事件是由其自身所携带的禽流感病毒暴发所引起的,该区域内家禽发生疫情的风险不高。     

H5N1亚型禽流感病毒对鸭的致病性研究

为评估H5N1亚型禽流感病毒(AIV)在实验室环境下对鸭的致病力,本研究以无特殊病原(SPF)鸭为模型,对我国近年分离的7株病毒进行了致病力分析。结果发现其中4株病毒对鸭致死率为100%,2株病毒对鸭的致死率分别为60%和80%,另外1株病毒,A/goose/Hubei/51/05(GS/HB/51/05),对鸭无致病力。本研究还发现,与高致病力毒株一样,GS/HB/51/05也可在鸭体内呈全身性复制,并且可通过喉头和泻殖腔向外排泄。我们推测GS/HB/51/05可能是中国南方出现的其他对鸭呈高致病力的H5N1病毒的祖先,对这些病毒的系统研究,可揭示H5N1亚型AIV对鸭的致病力遗传机制。     

几种布鲁氏菌病检测方法的比较

为研究虎红平板凝集试验(RBT)、全乳环状试验(MRT)、间接酶联免疫吸附试验(iELISA)及胶体金检测试纸条对布病的检测效果,本研究采用以上方法分别对感染地区和净化地区的牛群血清、羊群血清、牛群奶样进行了检测效果的比对。结果显示,针对牛群血清,RBT结果阳性率最高,iELISA与胶体金结果阳性率相似,表明RBT的敏感性较好,iELISA与胶体金检测试纸条的特异性较RBT好;针对羊群血清,iELISA与胶体金检测试纸条的敏感性和特异性较RBT好;针对牛群奶样,MRT结果阳性率低于全乳iELISA和胶体金检测试纸条。全乳iELISA和胶体金检测试纸条在试验中显示出具有较高的敏感性和特异性。     

溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素的原核表达及多克隆抗体制备

【目的】构建溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素(LktA)原核表达系统,表达融合蛋白并进行纯化和鉴定,为溶血性曼氏杆菌检测方法的建立提供物质基础。【方法】设计并合成特异性引物,PCR扩增羊溶血性曼氏杆菌lkta截短基因;用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ对PCR产物和pET-28b(+)载体进行双酶切,用T4 DNA连接酶将溶血性曼氏杆菌lkta截短基因克隆到pET-28b(+)载体;使用IPTG诱导融合蛋白LktA的表达。通过Ni²⁺亲和层析纯化后采用SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行鉴定。用融合蛋白LktA免疫4月龄健康雌性新西兰大白兔制备多克隆抗体,4次免疫完成后进行抗体效价测定。【结果】测序结果表明,构建的表达载体中溶血性曼氏杆菌lkta基因序列正确;融合蛋白LktA的分子质量约为30 ku,在大肠杆菌中高效表达并以包涵体形式存在,在变性条件下纯化融合蛋白LktA电泳图显示条带单一,确定其纯度>90%;纯化的融合蛋白LktA可与His抗体进行特异性结合。将纯化的融合蛋白LktA免疫新西兰大白兔后成功制备出多克隆抗体,抗体效...     

H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/duck/HuBei/49/05株反向基因操作系统的建立

水禽是禽流感病毒的天然储存库,为了研究高致病性禽流感病毒对水禽致病性的分子基础,研究构建了DKHB/49/05的8质粒反向遗传操作系统。用Trizol从含A/duck/HuBei/49/05株病毒的鸡胚尿囊液中提取总RNA,用RT-PCR扩增PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS基因片段,将其分别克隆至pBD载体中。利用8质粒反向遗传操作系统,将重组的pBD质粒共转染293T细胞,成功拯救了该病毒,并命名为R-DKHB。