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本试验对PRRSV-ShB6(P60)株进行了不同冻存时间和冻融次数对其毒价影响的评估。将病毒在-20℃冻存时间为90天,每隔15天进行毒价测定,结果发现其毒价下降趋势不明显,但病毒连续反复冻融12次,每次取样进行了病毒含量分析,结果发现其毒价整体呈波动性下降,前后变化较明显。结果表明,该毒株在科学合理的条件下保存,避免反复冻融,病毒活力相对稳定。 相似文献
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根据GenBank中收录的猪白细胞介素2(pIL-2)基因序列,设计1对特异性引物.运用RT-PCR技术从刀豆素(Con A)诱导的猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到pIL-2基因,并将其克隆至pGEM-T Easy栽体上.核苷酸测序结果显示,获得的基因序列全长493 bp,含465 bp的开放阅读框,编码154个氨基酸,与已知pIL-2核苷酸序列和氨基酸序列的同源性都高达100%.将克隆的pIL-2基因编码阅读框亚克隆至腺病毒穿梭栽体pShuttle-CMV,电转化含腺病毒基因组(pAdEasy-1)的大肠埃希茵细胞BJ5183-AD-1,成功获得了重组腺病毒DNA,将纯化后的重组腺病毒DNA转染AD-293细胞,经过病毒基因组的PCR鉴定和转录水平的RT-PCR鉴定,初步表明,获得了表达pIL-2的重组腺病毒. 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征病毒TM株的分离鉴定及其Nsp2序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的变异特点,本研究从广东省某猪场患有明显呼吸道症状的仔猪肺脏组织中分离到一株病毒,利用RT-PCR、基因序列分析,确定为美洲型PRRSV,命名为TM株。Nsp2基因序列分析发现,与美洲型标准毒株VR-2332相比,该分离株在481位和532位~560位共有30个氨基酸缺失;此外,与近年来国内分离的PRRSV变异株相比,在22位~42位有21个氨基酸的独有缺失。回归试验表明,该分离株可引起仔猪表现明显的临床症状和病毒血症,证实我国已经出现新缺失高致病性PRRSV毒株。 相似文献
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为了解2010年-2011年广东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异情况,采用RT-PCR方法扩增所分离的16株PRRSV的Nsp2和ORF5的基因,应用DNA Star、ClustalX2和MEGA5等对所得序列进行比对及遗传变异分析。16株PRRSV的Nsp2和ORF5基因的推导氨基酸序列同源性分别为75.3%~100%和87.5%~100%,与国内高致病性PRRSV代表毒株JXA1的氨基酸同源性分别为74.2%~98.2%和87.5%~99%。Nsp2遗传进化分析显示,这16株PRRSV均属于美洲型毒株,其中15株病毒与以JXA1为代表的国内流行毒株处于同一分支,属美洲亚群Ⅰ;另外1株病毒与VR-2332和疫苗株MLV处在同一分支,属美洲亚群Ⅱ。2010年-2011年广东地区流行毒株仍为高致病性PRRSV,且存在经典疫苗毒株MLV。 相似文献
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本研究旨在对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TP株P4、P60、P90三个代次毒株进行全基因组序列测定,分析其遗传变异特性。通过分段RT-PCR、5′RACE和3′RACE法扩增病毒基因组,并运用生物信息学软件和动物致病力试验进行相关分析。结果表明:TP株P4、P60、P90株基因组全长分别为15346、15394和15393bp。3个代次病毒的基因组序列中ORF1a基因和3′-UTR区域变异较大,尤以Poly(A)尾序列碱基数差异显著,分别为26、74和73bp。3代次毒株基因组序列比对发现TPP90与TPP4差异较大,共有58个核苷酸位点和27个氨基酸位点发生突变,P90GP5蛋白抗原指数和表面亲和力与TPP4和TPP60相比呈增加趋势,动物致病力试验表明TPP4毒株致病力较TPP60和TPP90强。结果提示:TPP4、P60、P903代次毒株基因组序列存在着一定的差异,主要集中在4~60代致弱阶段,遗传进化关系上该病毒分属于PRRSV美洲株分支,并与高致病性PRRSV JXA1株亲缘关系最为接近,相似性高达99.5%、99.2%和99.3%。 相似文献
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两株死胎源猪圆环病毒Ⅱ型的分离与序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
将两猪场Ⅱ型猪圆环病毒(PCV2)核酸阳性的流产死胎病料,接种猪肾传代细胞PK15,成功分离到2株PCV2。利用1对PCV2特异性引物,成功扩增出这2株PCV2长约1700bp的全基因组序列,并与其他PCV2毒株序列进行相似性比较。结果表明:2个分离株全基因组长度均为1767bp,核苷酸序列相似性为99.9%;ORF2基因核苷酸相似性为99.85%,所编码的衣壳蛋白氨基酸序列相似性为100%;2个分离株与SD-3等国内分离株核苷酸序列的相似性较高,最高可达99.9%。 相似文献