不同海拔牦牛骨骼肌线粒体呼吸链复合酶活性及氧化应激指标的差异分析

线粒体呼吸链是实现氧化磷酸化的分子机构,被广泛证实是活性氧产生的主要来源,活性氧的积累会造成细胞氧化应激,因此为了阐明不同海拔地区牦牛骨骼肌线粒体呼吸链复合酶活性及抗氧化能力的差异,试验从高(海拔4 200 m)、中(海拔3 200 m)、低(海拔1 900 m)海拔地区随机选择临床健康成年雄性牦牛各5头(分别分为高、中、低海拔组),屠宰后取骨骼肌采用比色法测定5种线粒体呼吸链复合酶和抗氧化关键酶的活性及氧化应激指标。结果表明：随着海拔的升高,牦牛骨骼肌线粒体呼吸链复合酶Ⅰ～Ⅴ活性均表现为逐渐降低的趋势,其中高海拔组牦牛骨骼肌线粒体呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ活性与中、低海拔组牦牛差异显著(P<0.05);低海拔组牦牛骨骼肌线粒体呼吸链复合酶Ⅱ、Ⅴ活性与中、高海拔组牦牛差异显著(P<0.05)。随着海拔的升高,牦牛骨骼肌中羟自由基、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性逐渐下降,且各组间显著差异(P<0.05);总抗氧化能力(T-AOC)先升高后降低,中海拔组牦牛骨骼肌显著高于低海拔组和高海拔组(P<0.05);超氧化物歧化酶(SOD)活性先下降...     

不同海拔牦牛骨骼肌肌纤维类型和MYHC基因表达的比较

为了阐明高原低氧对牦牛骨骼肌肌纤维类型的影响,本试验从青海省循化县(海拔2 200 m)、青海省海晏县(海拔3 200 m)、青海省祁连县(海拔3 900 m)选择临床健康的牦牛各3头,采用免疫组织化学方法(免疫荧光同源双标法)观测其骨骼肌中快肌、慢肌含量及比例和实时荧光定量PCR检测不同海拔牦牛骨骼肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain, MYHC)各亚型mRNA的变化。结果表明,牦牛骨骼肌中快肌数量显著高于慢肌且随着海拔的升高,快肌数量比和面积比逐渐增大,而慢肌数量比和面积比逐渐减小。牦牛骨骼肌中MYHC各亚型间,MYH2基因相对表达量最高,其次是MYH1,且与MYH7相比差异显著(P<0.05);不同海拔牦牛骨骼肌MYHC相互比较,MYH1和MYH4基因相对表达量随海拔的升高而增加,差异显著(P<0.05)。快、慢肌的差异表达提示在牦牛体快肌纤维多于慢肌纤维;MYHC基因表达差异说明牦牛骨骼肌中调控快肌纤维表达的基因mRNA转录水平比调控慢肌纤维表达的基因高。牦牛骨骼肌表现出这种趋势可能与其所处的高原低氧环境有关,随海拔增高,环境中的氧含量不断减少,肌纤...     

iNOS在大通牦牛和平原黄牛肺脏组织中增龄性表达变化研究

为了阐明大通牦牛肺脏组织中诱导型一氧化氮化酶(iNOS)随着年龄增长的变化趋势和特点,试验从青海省大通县(海拔3 200 m)选取健康的1日龄、30日龄、180日龄和成年的大通牦牛作为研究对象,同时选择湖北省襄阳市(海拔约100 m)相同发育阶段的平原黄牛作为对照,采用实时荧光定量PCR和Western-blot分析,从基因和蛋白质水平对大通牦牛iNOS在不同发育阶段中的表达情况进行研究。结果表明：随着年龄增长,大通牦牛肺脏组织iNOS基因表现为先降低再升高的趋势,与成年时比较,1日龄时相对表达量最高(P<0.05),30日龄时相对表达量最低(P<0.05);平原黄牛表现为随着年龄增长逐渐降低的趋势,与成年时比较各日龄时均差异显著(P<0.05)。相同发育阶段,1日龄时大通牦牛肺脏组织iNOS基因相对表达量显著高于平原黄牛(P<0.05),30日龄时显著低于平原黄牛(P<0.05),180日龄时差异不显著(P>0.05),成年时显著高于平原黄牛(P<0.05)。肺脏组织iNOS蛋白表达,无论是不同发育阶段的变化趋势,还是相同发育阶段的表达特点,...     

不同海拔牦牛骨骼肌代谢关键酶比较分析

为分析不同海拔牦牛骨骼肌代谢关键酶的含量及其酶活性，本试验选取3个海拔高度(4 200、3 200和1 900 m)的牦牛作为研究对象，其中低海拔牦牛作为对照，运用电镜技术观测牦牛骨骼肌的线粒体相关指标，运用ELISA方法测定骨骼肌代谢关键酶乳酸脱氢酶(LDH)和琥珀酸脱氢酶(SDH)的含量、酶活性和LDH同工酶类型。结果显示，随海拔升高，肌红蛋白(Mb)和有氧代谢关键酶SDH含量和酶活性逐渐增强，中海拔和高海拔牦牛的Mb含量和SDH酶活性均高于低海拔牦牛且差异显著(P<0.05),高海拔牦牛SDH含量大于低海拔牦牛且差异显著(P<0.05);随海拔升高，无氧代谢关键酶LDH含量和酶活性逐渐降低，中海拔和高海拔牦牛LDH含量和酶活性均低于低海拔牦牛且差异显著(P<0.05);3个不同海拔牦牛5种LDH同工酶中LDH5占比最高，随着海拔升高，LDH1、LDH2、LDH4和LDH5含量逐渐下降，中海拔和高海拔牦牛LDH1和LDH2含量均低于低海拔牦牛且差异显著(P<0.05),高海拔牦牛LDH4和LDH5含量均低于低海拔牦牛且差异显著(P<0.05)。结果表明...     

喜马拉雅旱獭心肌低氧适应的组织学特点

为了阐明喜马拉雅旱獭心肌适应高原低氧环境的组织学特点，试验以5只成年喜马拉雅旱獭为研究对象，以SD大鼠为对照，采取左心室心肌组织，运用组织学技术研究其心肌肌纤维直径和表面积密度；免疫组织化学方法检测心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)及微血管密度(MVD)等指标，运用电镜技术测算心肌线粒体的部分结构参数，包括平均体积、面数密度、体积密度等。结果表明：喜马拉雅旱獭心肌肌纤维直径比SD大鼠小，并存在显著差异(P<0.05),而喜马拉雅旱獭心肌肌纤维表面积密度大于SD大鼠且差异显著(P<0.05),喜马拉雅旱獭的VEGF含量和MVD均高于SD大鼠且差异显著(P<0.05),喜马拉雅旱獭心肌线粒体的平均截面积、平均体积均小于SD大鼠且差异显著(P<0.05),而喜马拉雅旱獭心肌线粒体的体积密度、面数密度均大于SD大鼠且差异显著(P<0.05)。说明与SD大鼠相比，喜马拉雅旱獭的心肌特点表现为肌纤维直径小、表面积密度大、VEGF含量和MVD高的特点，心肌线粒体表现为平均体积小、面数密度和体积密度大的特点，喜马拉雅旱獭心肌对高原具有低氧环境适应的组织学特征。     

不同发育阶段大通牦牛骨骼肌肌纤维类型及MyHC基因表达

为了阐明不同发育阶段大通牦牛骨骼肌纤维类型变化特点及其低氧适应机制，本试验从青海省大通县(海拔3 200 m)选取健康的1,30,180日龄和成年的大通牦牛作为研究对象，选择湖北省襄阳市(海拔约100 m)相同发育阶段的平原黄牛作为对照，采用免疫组织化学染色的方法观测骨骼肌中快肌和慢肌的含量及比例的变化；采用实时荧光定量PCR检测不同海拔牦牛骨骼肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain, MYHC)基因各亚型mRNA表达的变化。结果表明：随年龄增长，大通牦牛骨骼肌快肌数量逐渐增多，慢肌数量比逐渐减少(P<0.05);在同一发育阶段，大通牦牛骨骼肌快慢肌数量比均高于平原黄牛，且差异显著(P<0.05);随着年龄的增长，大通牦牛快慢肌面积比呈现逐渐减少的趋势；在相同发育阶段时，除30日龄外，大通牦牛快肌面积比在其余3个年龄段均低于平原黄牛，而慢肌面积比则高于平原黄牛；大通牦牛骨骼肌中MyHCⅠmRNA含量逐渐升高，MyHCⅡa mRNA含量先升高后降低，MyHCⅡx和MyHCⅡb mRNA含量逐渐降低，且呈现随年龄增长快肌向慢肌转化的特点。以上结果说明了大通牦牛骨骼...