用RAPD技术检测不同来源微孢子虫基因组DNA多态性

家蚕微粒子病是由微粒子原虫（微孢子虫）类寄生于蚕体引起的病害。微粒子病对蚕丝业生产危害极大,一直被列为蚕种制造检疫对象。许多学者对病原的传播途径、侵染机制及分类地位作了大量研究。其中微孢子虫的分类又以血清学关系、发育增殖方式和孢子超微结构作为主要划分依据,这些表型依据仍然具有局限性。随机扩增多态性ＤＮＡ技术（ＲａｎｄｏｍｌｙＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ,ＲＡＰＤ）因能方便、快速提供ＤＮＡ多态性的丰富信息而被广泛用于动植物和微生物的遗传差异、亲缘关系和进化分类等领域,但应用于微…     

九种微孢子虫核糖体小亚单位RNA(SSUrRNA)基因拷贝数的研究

以已克隆测序的家蚕微孢子虫 (镇江株 ,Nosemabombycis)的核糖体小亚单位RNA(SSUrRNA)编码基因(12 0 5bp)为模板 ,用随机引物合成法标记的探针 ,在与 9种微孢子虫及家蚕基因组DNA的 6种限制性内切酶的酶切产物的Southern杂交图谱中 ,9种微孢子虫基因组DNA酶切产物的杂交图谱极为相似 ,而与家蚕基因组DNA的任何一种酶的酶切产物均无杂交信号 ,表明微孢子虫和家蚕的SSUrRNA基因同源性很低或没有同源性。同时还证实了已克隆的SSUrRNA基因来源于微孢子虫基因组DNA ,不是从家蚕基因组DNA扩增而来。在酶解较为完全的酶切产物的杂交图谱中 ,微孢子虫基因组DNA中SSUrRNA基因的拷贝数至少在 15以上     

微孢子虫RNA的制备方法

微孢子虫外被厚壁的主要成分为几丁质与蛋白质 ,故对外界不良环境具有较强的抵抗性。因此 ,获取微孢子虫孢原质的主要方法是利用孢子在碱性环境[1] 、酸性环境[2 ] 、从酸性环境转至碱性环境[3] 或从强碱性环境转至弱碱性环境或中性环境[4] 等条件下 ,极丝容易弹出而释放出孢原质的特点。也可采用玻璃珠破碎法[5] 来获取微孢子虫的孢原质。获取的孢原质目前主要用来提取微孢子虫的基因组ＤＮＡ ,而关于微孢子虫ＲＮＡ的制备方法国内外均未见报道。我们在异硫氰酸胍法的基础上加以改进 ,高效地提取到无降解的微孢子虫ＲＮＡ。1　材料与方法1 …