类人源猪H3N2亚型流感病毒HA,NA遗传进化分析

2007-2008年从吉林省某猪场采集疑似流感发病猪的鼻咽拭子,经病毒分离鉴定获得3株H3N2亚型流感病毒,分别命名为A/swine/Jilin/5/2007（Sw/Jilin/5/07）、A/swine/Jilin/19/2007（Sw/Jilin/19/07）、A/swine/Jilin/37/2008（Sw/Jilin/37/08）。HA进化树分析结果表明：3株H3N2亚型流感病毒属于近代人源病毒谱系;但是在NA进化树中,Sw/Jilin/37/08株与早期人源和近代人源关系密切,暗示它可能是早期人源和近代人源H3N2亚型猪流感病毒之间的过渡毒株,进一步证实猪在流感病毒种间传播过程中充当＂中间宿主＂作用。     

鸡胚成纤维细胞膜上禽流感病毒受体蛋白的鉴定

提取鸡胚成纤维细胞膜蛋白,利用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)鉴定禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞膜上的受体。结果显示,所提取的细胞膜蛋白中含有8条疑似病毒受体条带。本实验初步鉴定了禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞上的受体蛋白,为揭示流感病毒感染鸡的机制提供了初步证据。     

类人猪H3N2流感病毒与禽H5流感病毒重组:一个潜在的公共威胁

将2007年7月-2008年10月从吉林省猪群中分离到的3株H3N2亚型流感病毒,分别命名为A/swine/Jilin/A/2007(Sw/Jilin/A/07),A/swine/Jilin/B/2007(Sw/Jilin/B/07)和A/swine/Jilin/C/2008(Sw/Jmn/C/08).结合已知猪流感病毒(SIV)内部基因序列,设计合成6时特异性引物,通过RT-PCR技术分别扩增出6段内部基因,并与GenBank中相关序列进行比较,分析3株流感病毒内部基因的遗传进化关系.结果表明:在PB2、PB1、PA和NP的进化树上,3株H3N2分离株处于近代人源谱系内;在M和NS进化树中,Sw/Jilin/A/07和Sw/Jilin/B/07处于近代人源谱系内,而Sw/Jilin/C/08与禽源谱系内的H5亚型病毒亲缘关系最近.     

表达猪H1N1亚型流感病毒三聚体HA的重组慢病毒包装

以RT—PCR扩增猪H1N1流感病毒HA基因,用GS-linker使HA与GCN4pⅡ连接。构建慢病毒蛋白表达系统。通过观察荧光、病毒转导效率、SDS—PAGE、Western blot验证重组慢病毒包装和HA—GCN4pⅡ融合蛋白表达情况。该系统能使外源基因得到持久和稳定的表达。结果,包装获得能够融合表达HA-GCN4pⅡ的重组慢病毒LV—HA-GCN4pⅡ,病毒滴度为1．1×10^6TU／mL;LV—HA—GCN4pⅡ能有效转导293T细胞。本试验成功构建了表达HA—GCN4PⅡ融合蛋白的慢病毒表达载体,获得的重组慢病毒不仅为后续动物试验测定其诱导的体液免疫和细胞免疫水平奠定了基础,同时也为研制猪H1N1亚型流感疫苗做出了有益尝试。     

流感病毒与细胞受体相互作用的复杂性

细胞受体是流感病毒感染、复制与传播的生物学基础.病毒血凝素基因的差异和细胞上不同类型的受体是影响病毒受体结合特性的两个重要因素.了解这两个因素有助于人们进一步认识流感的病原学、感染机制、流行病学等内容,对于流感的监测、疫苗研制和公共卫生学都将有借鉴意义.论文就流感病毒基因特点、细胞受体类型差异及二者相互作用的复杂性进行综述.     

稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系的构建及鉴定

设计1对特异性引物扩增痘苗病毒VTF7-3株的T7RNA聚合酶基因并连接真核表达载体,利用Lipo-fectamineTM2000将重组质粒转染BHK-21细胞,G418筛选2周后,转入验证质粒pT7-HN,经Western-blot和间接免疫荧光鉴定后证实获得了1株能稳定表达T7RNA聚合酶的VT7细胞系。构建的VT7细胞系传30代还能够稳定的表达T7RNA聚合酶,为下一步建立有效的鹅源副黏病毒病毒反向遗传操作平台奠定了基础。