限时喂养对DNA疫苗免疫效果的影响

目的：近年来,限时喂养被广泛关注,在成功构建H1N1流感病毒血凝素(HA)的重组质粒pcDNA3.1(+)-HA的基础上,将其作为DNA疫苗注射BALB/c小鼠,比较限时喂养对小鼠免疫效果的影响。方法：将DNA疫苗按照25 μg剂量肌肉注射小鼠,并对其进行限时喂养,2周后加强免疫,免疫2周后通过红细胞凝集抑制试验、脾细胞刺激试验,观察小鼠体液及细胞免疫的变化。结果：经验证,限时喂养在一定程度上可以增强小鼠免疫功能。     

HA基因真核表达载体构建及在293T细胞中的表达

目的：为后续进一步研究H1N1病毒DNA疫苗对小鼠免疫系统的影响提供技术支撑。方法：应用PCR方法体外扩增血凝素(HA)基因全序列,并利用pcDNA3.1(+)载体构建甲型流感病毒(H1N1)血凝素(HA)的真核表达质粒(pcDNA3.1 (+)-HA),经双酶切鉴定后,转染293T细胞,通过RT-PCR和Western blot方法观察该重组质粒在293T细胞中的表达情况。结果表明,pcDNA3.1 (+)-HA重组质粒构建成功;与空白及阴性对照相比,转染293T细胞48 h后的HA mRNA水平显著上升(2.4×10³,P<0.000 1),并能在293T细胞中成功表达,为深入研究H1N1病毒DNA疫苗对小鼠免疫系统的影响奠定了基础。