原核表达c-myc蛋白的多克隆抗体制备

探讨利用小鼠制备抗人c—myc蛋白多克隆抗体的方法。利用含PET28a／c—myc质粒的EcoliBL21,对c—myc蛋白进行原核表达,并进行纯化。WesternBlot结果只出现一条62KDa大小的特异性目的蛋白条带。用原核表达的c—myc蛋白抗原免疫5只Balb／c小鼠,最终免疫后的第7d采血,并对其血清效价进行ELISA（Enzyme—linked immunosorbnent assay）测定,抗血清达1：640000。本实验结果为c—myc单克隆抗体制备和肿瘤诊断试剂盒的研发提供基础实验数据。     

摩托车尾气对小鼠呼吸系统组织结构的影响

60只昆明种雄性小鼠随机分为3组,A组(对照组)、B组(用普通摩托车尾气染毒)和C组(用微型摩托车尾气染毒),染毒4周后处死,取出气管、肺脏制作组织切片观察其组织结构.结果表明,试验组小鼠的气管组织结构变得疏松,软骨组织和黏膜下层出现萎缩现象,尤其是C组的气管上皮出现化生,即由假复层纤毛柱状上皮变成鳞状上皮;试验组小鼠肺的各级支气管出现黏膜上皮细胞萎缩、纤毛脱落等现象,肺泡管、肺泡囊及肺泡也发生了一定程度的破坏,尤其是C组肺内小动脉出现管壁增厚、管腔狭窄等现象.     

二甲基砷酸对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞的毒性作用以及诱导细胞凋亡的机制

旨在用类金属毒性物质——砷对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞的染毒试验，探索砷对绒山羊皮肤成纤维细胞毒性作用和其诱导细胞凋亡的机制，为后续研究砷对绒山羊皮肤细胞生长的影响提供理论依据。本研究随机选取1只7月龄各项机能正常，体重为25 kg左右的雄性辽宁新品系绒山羊，取其腹部皮肤，进行细胞培养。将二甲基砷酸药物配制成11个不同浓度组（0、0.1、0.2、0.4、0.8、1、5、10、25、50、100 mmol·L^-1），对细胞量为3×10⁴个·mL^-1皮肤细胞进行药物染毒24、48、72、96 h后，经MTT法进行3次重复试验，得到绒山羊皮肤成纤维细胞的增殖与抑制情况以及后续试验所选用的时间点和4个浓度组（对照、促进、临界、半抑制浓度（IC₅₀）），进一步借助免疫荧光检测观察细胞骨架形态变化；彗星试验检测细胞DNA损伤情况；流式细胞仪检测细胞凋亡；透射电镜观察细胞质与细胞器的变化；测定细胞内荧光染料Mito-Tracker Green的染色强度分析线粒体跨膜电位（ΔΨm）以及观察分析溶酶体的数量情况。结果，24 h时不同浓度的OD值均能明显地反映出二甲基砷酸对绒山羊皮肤成纤维细胞的增殖和抑制趋势，而48、72、96 h时增殖作用逐渐减弱甚至消失，24 h时细胞增殖与抑制效果最佳，因此选取24 h时的对照组（未做任何处理）、促进浓度组（0.8 mmol·L^-1）、临界浓度组（1 mmol·L^-1）、IC₅₀浓度组（38.68 mmol·L^-1）进行后续的试验。24 h时，剂量范围0.1～1 mmol·L^-1的二甲基砷酸促进绒山羊皮肤成纤维细胞增殖，此阶段细胞骨架形态完整，细胞DNA未出现拖尾现象，凋亡率较小，线粒体数目增多，膜结构清晰，嵴致密，形态完整，膜电位升高，溶酶体数量增多；浓度大于1 mmol·L^-1的二甲基砷酸抑制绒山羊皮肤成纤维细胞生长，引起明显的细胞毒性（P<0.01），此时细胞骨架形态发生改变，DNA未出现拖尾现象，凋亡率显著上升，线粒体发生肿胀，形态不规则，嵴断裂溶解，膜电位降低，溶酶体数量减少。IC₅₀组细胞骨架形态差异很大，细胞DNA出现彗星尾，最多最明显（P<0.01），细胞凋亡数目明显增多，膜电位明显降低（P<0.01），溶酶体数量显著下降（P<0.01）。本研究探索了二甲基砷酸对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞的毒性作用以及诱导细胞凋亡的机制，表明一定浓度的二甲基砷酸对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞具有毒性作用，并具有进一步诱导细胞凋亡作用。     

辽宁新品系绒山羊微卫星标记与经济性状相关性的研究

为了在生产实践中进行多目标性状的选育,本研究利用微卫星标记技术对辽宁新品系绒山羊所有染色体(29条)上125个微卫星位点进行了研究,分析了体质量、绒产量和绒细度3个经济性状与标记基因型的关系。结果表明,除BM1312等10个为单态外,其余111个呈高度多态(PIC>0.5),4个呈中度多态(0.25相似文献   

摩托车尾气对小鼠睾丸组织形态的影响

为研究摩托车尾气对小鼠睾丸形态的影响,用不同摩托车的尾气染毒小鼠4周后,取出睾丸制成组织切片,观察并分析睾丸组织结构的变化.结果表明,试验组睾丸生精小管内的生精细胞变得很稀疏,管腔内发现畸形精子,且精子数量减少,并有出血现象.生精小管之间的结缔组织结构变薄且不完整,其间质细胞也明显减少.还发现不同种类摩托车的尾气,对睾丸组织结构的影响也不同.     

电脑辐射对小鼠空肠组织学的影响

以小鼠为模型研究电脑辐射对空肠组织学的影响.用某品牌笔记本电脑对小鼠进行28 d的辐射,然后将其采血后解剖,取出空肠制作成组织切片进行观察.辐射两周后试验组体重明显低于对照组,血红蛋白含量降低,空肠小肠绒毛变短,排列疏松,出现吸收细胞萎缩,纹状缘脱落的现象,肠绒毛根部细胞的结构比较完整,但尖端出现了断裂现象.     

慢病毒介导小鼠K26/KAP26.1基因过表达对相关基因的调控作用

【目的】利用慢病毒介导过表达技术,明确小鼠K26和KAP26.1基因过表达后对角蛋白关联蛋白基因KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、KAP11.1和对骨形态发生蛋白基因BMP-4、BMPR-IB的影响,探究小鼠绒毛细度变化的影响机制,达到人为调控(如慢病毒载体技术)使相关基因过表达,改善动物绒毛品质的目的,为哺乳动物绒毛细度调控的研究奠定理论基础,【方法】试验在辽宁省生物技术与分子药物研发重点实验室完成,小白鼠采自大连医科大学实验动物中心,选取出生后5周龄昆明种雄鼠。在Genebank查找到小鼠基因K26(Gene ID:NM_001033397)及KAP26.1(Gene ID:NM_027105.2)序列,根据目的基因序列设计引物,将质粒转入生长状态良好的293T细胞,构建小鼠K26和KAP26.1基因慢病毒过表达载体,将含有目的基因K26及KAP26.1的慢病毒表达载体分别转染小鼠皮肤成纤维细胞,用荧光显微镜观察其转染情况,确定慢病毒表达载体转染成功后,从病毒感染后的细胞中抽提总RNA,将RNA反转录成c DNA后放入Eppendorf Realplex荧光定量PCR仪,检测K26和KAP26.1基因过表达对KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、KAP11.1、BMP-4和BMPR-IB基因表达的影响。【结果】经RT-PCR检测,证明小鼠慢病毒载体p Lenti6.3-K26-IRES-EGFP和p Lenti6.3-K26.1-IRES-EGFP构建成功。经荧光场对比,发现目的慢病毒载体转染293T细胞72h时转染率最高。经PCR检测,证实包装好的目的慢病毒K26及KAP26.1转染小鼠成纤维细胞72 h后转染成功。经RT-PCR检测与SPSS Statistics 19软件分析目的基因表达量与阳性对照组(空载体质粒组,BLACK)、阴性对照组(小鼠表皮成纤维细胞,NC)表达量之间的显著性差异,发现K26基因过表达会导致KAP26.1基因上调,反之亦然,说明K26和KAP26.1基因之间存在一定的协同作用;K26和KAP26.1基因过表达后,均能导致KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、KAP11.1基因下调;K26基因过表达能使BMP-4基因表现为上调,而BMPR-IB基因表现为下调;KAP26.1基因过表达时,BMP-4和BMPR-IB基因均表现为上调。【结论】K26与KAP26.1基因在毛囊的内根鞘中起到协同作用,K26和KAP26.1基因的高表达会抑制KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、KAP11.1基因的表达,影响m TOR下游蛋白合成信号,进而起到调节绒毛粗细的作用;K26和KAP26.1基因过表达均能使BMP-4基因表现为上调,BMP-4是BMP信号通路的激活剂,能够激活BMP信号通路向下游转导,进而影响到毛囊的发育周期;K26基因过表达下调BMPR-IB基因的表达,而KAP26.1基因过表达上调BMPR-IB基因的表达,BMPR-IB基因是BMP信号的Ⅰ型受体,当BMPR-IB受体减少时,会抑制BMP信号向下游转导,从而使绒毛生长周期重新开始;当BMPR-IB受体增加时,会促进下游信号分子转录,进而影响毛囊发育周期。说明K26和KAP26.1基因过表达均能激活BMP信号通路,并由BMP和m TOR信号调节KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、KAP11.1、BMP-4和BMPR-IB基因的表达,但K26与KAP26.1基因对BMPR-IB基因的相反调节作用有待深入研究。