cDNA-AFLP技术及其在基因差异表达中的应用

cDNA-AFLP技术是一种在转录水平上研究基因差异表达的分子生物学实验技术,由于其具有起始材料量少、假阳性低、重现性、灵敏度高且不需预先知晓序列信息等优点,被广泛应用于各类生物差异表达基因的研究。就cDNA-AFLP技术的基本原理、发展历史和技术特点以及在微生物研究尤其是乳酸菌发酵研究中的潜在应用价值进行了综述。     

重组乳酸乳球菌的异常毒性评价

[目的]评价重组乳酸乳球菌的异常毒性,为其制备黏膜免疫活载体疫苗及免疫型微生态制剂提供理论支持。[方法]给小白鼠腹腔注射不同剂量的表达金黄色葡萄球菌纤黏蛋白原凝集素A(ClfA)的重组乳酸乳球菌MG1363/pMG36c-clf A菌液,评价重组乳酸乳球菌的异常毒性。[结果]注射高、中、低剂量重组乳酸乳球菌液的各组小白鼠7 d内无一死亡,体重增长正常。[结论]重组乳酸乳球菌对机体未见异常毒性,适合制备黏膜免疫基因工程活载体疫苗和免疫型微生态制剂。     

铜绿假单胞菌混合蛋白疫苗制备研究

为了制备免疫力高、不良反应少的铜绿假单胞菌混合蛋白疫苗,试验采用间接ELISA方法测定内毒素蛋白、类毒素和外膜蛋白免疫后小鼠的血清抗体效价,鲎试剂凝胶半定量方法测定上述3种蛋白的内毒素含量,采用"高免疫力+低内毒素"作为配伍指标制备5组混合蛋白疫苗,分别编为1～5号,间接ELISA法测定混合蛋白疫苗的免疫力水平,鲎试剂凝胶半定量方法测定混合蛋白疫苗的内毒素含量,小鼠腹腔注射法测定混合蛋白疫苗的异常毒性。结果表明:三种蛋白免疫后,小鼠血清抗体效价均随免疫进程持续升高,内毒素蛋白抗体效价最高,达到1∶12 500;内毒素蛋白中内毒素含量(E_内)为8.00 EU/mL,类毒素中内毒素含量(E_类)为1.73 EU/mL,外膜蛋白中内毒素含量(E_外)为2.24 EU/mL;3号混合蛋白疫苗(内毒素蛋白∶类毒素∶外膜蛋白=60∶20∶20)血清抗体效价达到了1∶12 800,其内毒素含量(E_3)为5.66 EU/mL;3号混合蛋白疫苗异常毒性试验合格。说明3号混合蛋白疫苗免疫效果好,与内毒素蛋白持平,且内毒素含量低于内毒素蛋白。     

奶牛乳房炎多联菌苗的临床免疫试验

选取体细胞数6．0×10^5-1．2×10^6范围内的奶牛30头,随机分成3组,即对照组、实验1组和实验2组,每组10头。对照组肌肉注射无菌生理盐水,实验1组注射奶牛乳房炎多联菌苗1号,实验2组注射多联菌苗2号,注射量均为1mL,每隔6d注射一次,共给药5次。首次注射前及注射后第7、14、21、28d采取乳样,进行体细胞计数。实验28d后对照组奶牛体细胞平均数远远大于实验前的水平,差异显著（P〈0．05）,说明隐性乳房炎不经治疗,有很大的可能性恶化;实验1组和2组奶牛体细胞平均数远远小于实验前的水平,差异极显著（P〈0．01）,说明多联菌苗1号和2号治疗奶牛乳房炎疗效明显;实验1组和实验2组奶牛体细胞平均数差异显著,多联菌苗2号的效果好于1号。     

奶牛乳房炎多联菌苗预防小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎试验

为评价奶牛乳房炎多联菌苗对小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎的防治效果，构建了金黄色葡萄球菌性乳腺炎小鼠模型，确定使试验小鼠100％发病的最小剂量。采用奶牛乳房炎多联菌苗免疫雌性小鼠，共免疫2次，首末免疫间隔14d，首免后第7天免疫组雌鼠与雄鼠合笼，分娩后第10天对免疫组雌鼠进行攻菌试验，24h后观察雌鼠体征和乳区外观变化，进行乳腺内细菌计数，测定发病率。结果表明，奶牛乳房炎多联菌苗免疫后可使小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎发病率降低83．3％。     

铜绿假单胞菌对养殖业危害及耐药性研究概况

铜绿假单胞菌广泛存在于养殖场土壤、饮用水、环境物品以及牲畜体内,在畜禽免疫力低下时可造成各种急慢性感染,进而发展成致死性腹泻、菌血症和败血症等疾病,危害动物健康.铜绿假单胞菌可通过突变或基因水平转移获得对抗生素的耐药性,近几十年来抗生素在医院和养殖业的使用,造成了该菌耐药菌株的大量出现,导致了抗生素疗效不佳.本文简要概...     

重组乳酸乳球菌对模拟胃肠道的耐受力研究

[目的]研究重组菌株在不同p H胃液和胆盐浓度肠液中的生存情况,验证重组菌株能否在肠道中发挥作用,为其制备基因工程活载体疫苗、新型免疫型微生态制剂及功能发酵食品提供理论依据。[方法]人工模拟人体胃肠道环境,研究表达金黄色葡萄球菌纤黏蛋白原凝集素A(Clf A)的重组乳酸乳球菌MG1363/p MG36c-clf A菌株在不同p H胃液和胆盐浓度的肠液中的耐受力。[结果]重组菌株在p H 3.0的人工胃液中处理2 h后,存活率约为88.6%;在0.3%胆盐浓度的人工肠液中处理2和4 h后,存活率约为83.6%和68.2%。[结论]重组菌株对胃肠道环境有较强的耐受力,适合制备基因工程活载体疫苗、新型免疫型微生态制剂及功能发酵食品。     

西藏灵菇乳对肿瘤的抑制作用

灵菇乳是采用从西藏灵菇菌在牛乳中进行发酵而制成的新型发酵乳制品。灵菇菌是发现于西藏和高加索高原地区，原始菌呈白色至淡黄色的菜花状菌朵，但不同于覃类的食用真菌。它是以牛羊乳等乳类为生活基质，将牛乳酸化凝固，不仅口感颇佳而且民间流传其具有多种神奇功效，如：降血脂、降血压、抗肿瘤、治风湿、美容养颜、减肥等等。虽然灵菇乳在民间流传较广较神奇，但并无人对它的真正功效进行过系统的科学试验和论证，     

奶牛乳房炎多联菌苗的临床免疫试验

选取体细胞数6.0×105～1.2×106范围内的奶牛30头,随机分成3组,即对照组、实验1组和实验2组,每组10头.对照组肌肉注射无菌生理盐水,实验1组注射奶牛乳房炎多联菌苗1号,实验2组注射多联菌苗2号,注射量均为1mL,每隔6d注射一次,共给药5次.首次注射前及注射后第7、14、21、28d采取乳样,进行体细胞计数.实验28d后对照组奶牛体细胞平均数远远大于实验前的水平,差异显著(P＜0.05),说明隐性乳房炎不经治疗,有很大的可能性恶化;实验1组和2组奶牛体细胞平均数远远小于实验前的水平,差异极显著(P＜0.01),说明多联菌苗1号和2号治疗奶牛乳房炎疗效明显;实验1组和实验2组奶牛体细胞平均数差异显著,多联菌苗2号的效果好于1号.