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本研究旨在构建溶葡萄球菌素基因牛乳腺特异表达载体(pEPB),转染牛胎儿成纤维细胞,为制备溶葡萄球菌素基因的转基因克隆牛提供核供体细胞.本研究以pEGFP-C1为载体骨架,通过PCR扩增牛2.6 kb的β-酪蛋白5′调控区及0.6 kb的3′侧翼区(poly A)序列作为调控序列,制备成含有绿色荧光和新霉素筛选标记的牛乳腺特异表达载体,经PCR和酶切鉴定正确后,用转染试剂FuGene HD反复转染牛pEPB乳腺上皮细胞3~5次,用催乳素诱导后,经免疫荧光分析,检测目的蛋白的表达.然后,用电转染法转染牛胎儿成纤维细胞,经G418筛选得到阳性细胞后,把阳性细胞扩大培养并提取其基因组,因为溶葡萄球菌素基因是外源基因,经PCR及Southern blot 检测来确定目的基因是否已经整合到细胞的基因组上.结果表明,溶葡萄球菌素基因在牛乳腺细胞中得到了表达,并整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组中,得到了转溶葡萄球菌索基因的核供体细胞.结果显示,本研究所获得的转基因牛胎儿成纤维细胞可作为体细胞核移植的供体细胞进行转基因克隆牛研究. 相似文献
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J亚群禽白血病病毒感染鸡的抗原和血清抗体变化规律 总被引:1,自引:0,他引:1
为了解鸡感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)后抗原和血清中抗体的变化规律,本研究经卵黄囊途径对6日胚龄SPF鸡胚,肌肉途径对31日龄和56日龄的SPF鸡感染ALV-J后,于不同时间采集胎粪或泄殖腔棉拭子,同时采集血液、分离血清,以检测p27抗原、J型抗体和p27抗体。结果显示,胚胎组在各检测点均可检测到p27抗原(仅1只鸡在1日龄时为阴性),而31日龄组和56日龄组检测不到p27抗原;胚胎组没有检测到p27抗体,31日龄组中80%的鸡在3次重复感染后可检测到p27抗体,56日龄组在首次感染后p27抗体的检出率较高(60%);各组J型抗体在各检测点基本为阴性(仅个别鸡在个别检测点为阳性)。结果提示,p27抗原和抗体的检测在ALV-J感染的早期诊断及禽白血病净化工作中具有重要意义。 相似文献
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以国家对中西部地区城市发展所实施的战略为前提,分析发展中西部地区的迫切性和重要性,提出我国中西部城镇化发展的重中之重--努力发展大中城市. 相似文献