应用B.melitensis 16M单克隆抗体建立羊布病的胶体金免疫层析检测体系

[目的]用B.melitensis16M提纯的LPS和O链抗原作为检测抗原,研制出针对B.melitensis16M的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断布病的胶体金免疫层析方法。[方法]B.melitensis16M全菌免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定免疫球蛋白亚类及亲和力。用HiTrapProteinGHP亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法。选择最佳反应模式组装成试纸条,对其特异性、敏感性、稳定性、阳性病料试验。[结果]筛选出能稳定分泌抗B.melitensis16M的种特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株2D10、3C6、1E10,单抗亚类分别为IgG2a、IgG1,亲和常数(k)介于1×10-8￣2.6×10-10。根据配对实验,以3C6为最佳包被抗体,2D10为最佳金标抗体。抗体IgG标记浓度为30μg/ml时,检测效果最佳。同时,与B.melitensis16M多抗IgG作为包被抗体、2D10为金标抗体的检测体系对比,两种包被方法组装的试纸条最低检出量为5.0×103CFU/ml,且不与其它菌发生交叉反应,保持期≥100d。以荧光定量PCR为参照,试纸条检测80份阳性病料,检检出率为100%。[结论]建立的胶体金免疫层析方法检测B.melitensis16M快速、简便、可靠,有望开发成为布病快速诊断试剂盒。     

微小隐孢子虫感染对大鼠血清抗氧化功能的影响

40只SD大鼠随机分为4组(n=10),即空白对照组、地塞米松及氢化可的松免疫抑制隐孢子虫感染组、非免疫抑制隐孢子虫感染组。免疫抑制感染组和非免疫抑制感染组大鼠一次口服接种1×103个/ml卵囊1ml,空白对照组口服1ml生理盐水。于感染前(0d)和感染后2、7、13、19d采集血样,检测大鼠血清丙二醛(MDA)的含量和超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性的变化。结果表明:大鼠接种隐孢子虫后,免疫抑制感染组大鼠CAT活性在感染后缓慢下降,但与空白对照组相比变化不明显;MDA含量高于空白对照组(P<0.05),SOD活性低于空白对照组(P<0.05);而GSH-Px活性先升高后降低。非免疫抑制感染组大鼠和空白对照组相比无显著差异。     

应用B.melitensis 16M单克隆抗体建立羊布病的胶体金免疫层析检测体系

目的 用B.melitensis 16M提纯的LPS和O链抗原作为检测抗原，研制出针对B.melitensis 16M的单克隆抗体（McAb），将其标记胶体金，建立一种诊断布病的胶体金免疫层析方法。方法 B.melitensis 16M全菌免疫Balb/C小鼠，采用杂交瘤细胞技术制备McAb，测定免疫球蛋白亚类及亲和力。用HiTrap Protein G HP亲和层析纯化抗体并用胶体金标记，建立胶体金免疫层析方法。选择最佳反应模式组装成试纸条，对其特异性、敏感性、稳定性、阳性病料试验。结果 筛选出能稳定分泌抗B.melitensis 16M的种特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株2D10、3C6、1E10，单抗亚类分别为IgG2a、IgG1，亲和常数（k）介于1×10-8~2.6×10-10。根据配对实验，以3C6为最佳包被抗体，2D10为最佳金标抗体。抗体IgG标记浓度为30μg/ml时，检测效果最佳。同时，与B.melitensis 16M多抗IgG作为包被抗体、2D10为金标抗体的检测体系对比，两种包被方法组装的试纸条最低检出量为5.0×103CFU/ml，且不与其它菌发生交叉反应，保持期≥100d。以荧光定量PCR为参照，试纸条检测80份阳性病料，检检出率为100%。结论 建立的胶体金免疫层析方法检测B.melitensis 16M快速、简便、可靠，有望开发成为布病快速诊断试剂盒。     

RNA干扰的作用机制及应用前景

RNA干扰是将双链RNA导入细胞引起特异基因mRNA降解的一种细胞反应过程,涉及多种蛋白质共同参与。此干扰机制可在转录、转录后和翻译水平上实现。转录水平上的干扰机制是通过对靶基因染色质结构的改变,使其基因转录受限,导致表达系统的关闭。翻译水平上的干扰机制,是通过抑制相应mRNA的翻译,使相应的蛋白质表达受阻。转录后水平则包括siRNA形成阶段和扩增循环阶段。siRNA形成阶段即外源性或内源性dsRNA通过Argonaute家族基因编码的蛋白质的识别,进一步诱导双链RNA与Dicer结合。扩增循环阶段即特异性siRNA与靶mR-NA结合后,没有被活性酶切割、降解;而是以siRNA中的一条链为引物,以靶mRNA为模板,在RNA依赖的RNA聚合酶的作用下,延伸形成新的双链RNA,被Dicer内切酶或相关酶切割为新的21 nt~23 nt siRNA。随着RNA干扰技术的不断进步,RNA干扰可广泛地应用到抗病毒,肿瘤治疗,药物靶点筛选以及免疫性疾病治疗等方面。     

微小隐孢子虫感染对大鼠血清抗氧化功能的影响

40只SD大鼠随机分为4组(n=10),即空白对照组、地塞米松及氢化可的松免疫抑制隐孢子虫感染组、非免疫抑制隐孢子虫感染组。免疫抑制感染组和非免疫抑制感染组大鼠一次口服接种1×103个/ml卵囊1ml,空白对照组口服1ml生理盐水。于感染前(0d)和感染后2、7、13、19d采集血样,检测大鼠血清丙二醛(MDA)的含量和超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性的变化。结果表明:大鼠接种隐孢子虫后,免疫抑制感染组大鼠CAT活性在感染后缓慢下降,但与空白对照组相比变化不明显;MDA含量高于空白对照组(P<0.05),SOD活性低于空白对照组(P<0.05);而GSH-Px活性先升高后降低。非免疫抑制感染组大鼠和空白对照组相比无显著差异。