大鲵致病性嗜水气单胞菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR诊断试剂盒的研制

根据GenBank中致病性嗜水气单胞菌特异性的气溶素基因序列,设计1对引物,利用普通PCR技术扩增获得hlyA基因片段,并克隆到pMD-18T载体上作为阳性标准品。通过对SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应条件的优化,建立了快速检测致病性嗜水气单胞菌的SYBR GreenⅠ荧光定量诊断方法,以此为基础研制出试剂盒。试剂盒扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,对非致病性嗜水气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌、迟缓爱德华菌、柱状黄杆菌均无阳性信号扩增,重复性好,灵敏度可达1.0x101拷贝/uL。结果表明研制的致病性嗜水气单胞菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速、重复性好等特点,适合于大鲵临床样品的检测。     

禽淋巴细胞性白血病的病理学观察与RT-PCR鉴定

采用组织病理学观察和RT-PCR检测对贵州省某鸡场一批230日龄疑似禽淋巴细胞性白血病的蛋种鸡群进行诊断。结果表明,该批发病蛋鸡群的眼观病变明显,肝脏、脾脏、肾脏、法氏囊和盲肠扁桃体肿大2～3倍;组织学检查显示肝、肾、法氏囊等组织中有大量大小一致的成淋巴细胞散在或呈团块状增生,挤压并破坏正常组织;选取针对禽白血病病毒群特异性抗原p27基因设计引物,经RT—PCR检测,可从发病蛋鸡肝和脾组织病料中扩增出与预期大小相一致（分子长404bp）的DNA片段,其中肝的特异性病原核酸的检出率达到90％,脾的特异性病原核酸的检出率达到50％。以上结果证实,该蛋鸡场存在禽淋巴细胞性白血病的感染,且通过PCR检测可得知肝脏的病原核酸检出率明显高于脾脏。     

斗鸡新城疫强毒感染的诊治

为对某斗鸡场病死斗鸡病死因进行确诊,进行了流行病学调查、剖检病变观察、细菌分离及RT-PCR检测试验,结果该场病死斗鸡肛门周围粘有灰绿色粪便,腹部、颈部、胰腺、腺胃等多处出血;在培养基上肝脏组织液无细菌生长。针对新城疫病毒（NDV）强弱毒基因序列之间的差异设计通用、强毒和弱毒引物,样本RNA经RT-PCR扩增后,通用型和强毒型鸡新城疫病毒扩增出特异性片段,弱毒引物未扩增出相应片段。由此确诊该场病死斗鸡为新城疫强毒感染。     

荔波瑶山鸡催乳素基因5′-调控区24-bp插入／缺失变异与早期产蛋性状的关系

为提高贵州地方鸡种荔波瑶山鸡的产蛋性能,以催乳素基因 PRL 为候选基因之一,利用 PCR 方法直接检测催乳素基因 PRL 的5′-调控区24-bp插入／缺失（－377～－354bp）变异情况,并分析其与产蛋性能的关系。结果表明,荔波瑶山鸡该位点83．8％为缺失型,无插入纯合子;不同基因型（PRL＋／＋、＋／－和－／－型）对荔波瑶山鸡早期产蛋性能均无显著影响（P＞0．05）。     

猪繁殖与呼吸综合症感染的诊断

猪繁殖与呼吸综合症是猪的一种高度接触性传染病,主要特征是引起妊娠母猪早产、流产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍及各种年龄猪呼吸系统疾病,仔猪高死亡率、感染猪出现免疫抑制等。高致病性猪繁殖与呼吸综合症由于持续感染、无特效药物以及隐性感染等原因,造成难以防控。猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）感染猪时能够引起免疫抑制,从而导致猪瘟病毒（ SCFV）、猪细小病毒（PPV）、猪狂犬病病毒（PRV）等混合感染或继发感染。针对贵州省贵阳市某猪场发病母猪送检样,根据流行病学与临床症状,对送检病死猪进行PRRSV、 SCFV、 PPV和PRV检测,对疫情做出确定性诊断。     

贵阳地区新发生猪传染病的血清学检测

采用血清学方法对贵阳地区部分种猪场、规模饲养场及农村散养户猪群分别进行PPV、PRV、PRRS、PCV及APP抗体水平监测。以乳胶凝集试验检测PPV抗体阳性率为0%（0/160）;以间接ELISA检测PCV和PRRS的抗体阳性率分别为14%（28/200）和0.62%（1/160）;以竞争ELISA检测PRV的gpI抗体阳性率为19.14%（36/188）;以间接血凝试验检测APP的抗体阳性率为19.14%（36/188）。结果表明,PPV和PRRS似乎不是引起贵阳地区猪繁殖障碍的主要原因,而PRV和APP在非免疫猪群中的抗体阳性率较高,应引起该地区养猪业的高度重视。     

牛附红细胞体病与寄生虫病混合感染的诊治

附红细胞体病(Eperythrozoonosis)是由附红细胞体(Eperythrozoon)寄生于红细胞表面、血浆和骨髓而引起的,以黄疸、贫血、发热、传染快、发病率高等为主要特征的一种高度传染性人畜共患病,又称为红皮病、黄疸性贫血、类边虫病、赤兽体病等〔1〕。世界上已在欧洲、亚洲、非洲、南美洲、大洋洲等37个国家和地区有关于本病的报道〔2〕。近年来,我国各省、市、自治区也相继报道了该病。附红体能感染黄牛、奶牛、猪、山羊、绵羊、马、驴、骡、骆驼、兔、鸡、鼠、猫、犬、水貂、南美洲驼羊、北极驯鹿、银狐等18种畜禽、野生动物及人     

仔猪大肠杆菌的分离及PCR检测

正猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌菌所致的一种仔猪的传染病,严重影响仔猪成活率。其临床表现主要为仔猪腹泻(黄痢、白痢)和水肿病。具有发病迅速、病程较短、发病率和死亡率均高的特点~([1])。该病对规模化集约化养猪业危害较大,给猪场带来较大的经济损失~([2])。笔者于2015~2017年开展了细菌分离和分子学(PCR方法)工作,为贵州省猪腹泻和水肿病大肠杆菌的临床鉴定和流行病学调查提供了可靠     

面向从江香猪选育的肌内脂肪活体超声无损测定

为探索从江香猪肌内脂肪含量的超声活体预测方法,该文选取110头从江香猪育肥猪开展活体测定,以超声图像为研究对象,利用Matlab R2015b软件提取灰度-梯度共生矩阵(gray gradient cooccurrence matrix,GGCM)及4个角度灰度共生矩阵(gray level cooccurrence matrix,GLCM)图像纹理特征参数。通过逐步回归分析法构建肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量预测模型,再将此模型应用于另外42头从江香猪,验证模型准确性。逐步回归分析结果表明,背膘厚、灰度平均和梯度熵3个参数指标达到显著水平(P0.05),回归预测模型决定系数R2=0.369。线性回归及相关分析得出,估测值与实测值间RMSE为0.686,皮尔逊积矩相关系数(pearson correlation coefficients)和斯皮尔曼相关系数(spearman correlation coefficients)分别为0.592和0.640(P0.001)。该研究所构建的拟合回归模型可应用于从江香猪肌内脂肪活体预测,为后期高肌内脂肪含量从江香猪的选育提供更为便捷有效的手段。     

1例藏香猪伪狂犬病、猪圆环病毒病与附红细胞体病混合感染的诊治

为对送检的发病藏香猪病死因进行确诊,本试验采用常规PCR、RT-PCR及荧光定量PCR方法,并结合流行病学调查、临床诊断及病理剖检等实验室检测对送检病料进行诊断,结果显示病死猪心脏、肺脏充血出血,肺脏肉变,气管内充满白色泡沫,全身淋巴结出血;荧光定量PCR方法检测猪圆环病毒呈阳性,PCR方法检出猪伪狂犬病病毒特异性条带,未见猪传染性胸膜肺炎放线杆菌、猪肺炎支原体条带,RT-PCR方法未扩增出猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒特异性条带;血液涂片染色镜检可见猪附红细胞体。结果表明病死猪为猪伪狂犬病、猪圆环病毒病与猪附红细胞体病混合感染,采用经实验室诊断给出的综合防治方案治疗后,疫情得到控制。本次病例的诊治为养猪业可能发生的猪伪狂犬病、猪圆环病毒病、猪附红细胞体病的混合感染提供了有效的防治方法和借鉴经验。