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猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)属于动脉炎病毒科、动脉炎病毒属的单股正链RNA病毒,是目前引起猪繁殖障碍的主要疫病之一,临床上以母猪发热、厌食、早产、流产和产木乃伊胎、死胎、弱仔等繁殖障碍及各种年龄猪的呼吸困难和仔猪的高死亡率为特征.根据抗原性差异和基因的同源性比较,一般将PRRSV分为欧洲型(原型毒株为LV)和美洲型(原型毒株为VR22332)两大类,病毒基因组大小约15 kb,包括8个开放性阅读编码框,其中ORF7编码的比较保守的非糖基化的核衣壳蛋白(N)具有较高的保守性,分子质量约15 ku,为病毒的优势结构蛋白,而且N蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,能激发机体较强的免疫应答. 相似文献
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影响猪的生长、发育、繁殖和生产性能的一切自然和社会因素、通称为猪的环境。在规模化猪场主要关注的是温度、湿度、空气质量和病原微生物的含量。其中又以温度为最重要。 相似文献
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[目的]克隆PRRSV Hn-1/06株GP5蛋白基因并构建其原核表达载体.[方法]根据PRRSV美洲株ATCC-VR2332的ORF5基因序列设计特异性引物,用RT-PCR方法从Hn-1/06株中扩增得到GP5蛋白基因的片段,与PTG19-T载体连接获得其阳性克隆PTG19-T-ORF5.以该基因片段为模板分别设计ORF5完整序列和删除信号肽的ORF5序列两条引物,进行PCR扩增,将目的片段与原核表达载体pET32a连接,并对其进行酶切鉴定.[结果]扩增得到GP5蛋白基因全长序列603 bp,编码200个氨基酸残基;具有3个潜在的N-糖基化位点和9个半胱氨酸;分子量为22.4 kD,等电点为8.550;双酶切pET32a-ORF5鉴定.结果与预期一致,证实重组质粒构建成功.[结论]成功构建了PRRSV Hn-1/06株GP5蛋白基因的表达载体,为深入研究GP5蛋白的本质与功能及其致病性奠定基础. 相似文献
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通过对PRRSV Hn-1/06株ORF5基因序列分析,设计删除信号肽和跨膜功能区的ORF5序列的3对引物,应用重叠延伸PCR以PTG19-T-ORF5质粒为模板进行扩增目的片段,得到长度为410 bp的片段。然后将此基因亚克隆到原核表达载体PET32a,经筛选获得了阳性重组质粒PET32a-ORF5abc,进而在IPTG的诱导下成功表达,获得了大小约为34 kD的融合蛋白GP5abc-His,Western blotting检测结果证实表达的融合蛋白具有良好的生物学活性。 相似文献
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根据GenBank中PRRSV美洲株ATCC VR2332的ORF2基因序列,利用Primer5.0软件设计合成了一对特异性引物,经RT-PCR从河南分离株Hn-1/06株扩增得到了大小为771 bp的片段,并将扩增的片段插入pTG19-T载体进行测序而获得含有ORF2的阳性克隆pTG19-T-GP2。将此基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1,经筛选获得了阳性重组质粒pGEX-GP2,进而在IPTG的诱导下成功表达,获得了大小约为45 kD的融合蛋白,纯化后经Western blot检测证实表达的融合蛋白具有良好的生物学活性。 相似文献