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将采自肉联厂屠宰车间的牛卵巢中的卵母细胞置于TCM-199+10%ECS(0d)+FSH(1万IU/L)+LH(5mg/L)中培养成熟,用含0.3%透明质酸酶的消化液将卵母细胞周围的卵丘细胞去掉,并以7.5mg/L的CB液处理后,用微吸管吸去透明带内的第一极体及极体下面的部分卵母细胞质,然后将经体外受精并发育至8~16细胞期胚胎的卵裂球注入去核卵母细胞的卵周隙中,再将移核胚置于电融合槽内进行融合(电场强度为1200V/cm,持续时间为80μs,1次脉冲刺激)。将融合的胚胎移入生长有单层贴壁颗粒细胞的发育培养液(TCM-199+10%牛血清)中培养,观察移核胚的融合率及发育率,部分去核卵母细胞经染色后观察去核率。结果表明:(1)移核胚的融合率为86.9%(53/61);(2)发育至2~8细胞期的胚胎占培养的移核胚胎总数的21.3%(10/47);(3)卵母细胞的去核率为68.2%(45/66)。 相似文献
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采用高场强单次脉冲(1600V/cm,80μs)及低场强3次脉冲(400V/cm,20μs,每次间隔20min)刺激体外成熟牛卵母细胞(成熟26h),激活率分别为86.5%(167/193)和92.7%(101/109),差异不显著(P>0.05),其中多原核率分别为8.3%(16/193)和59.6%(65/109),差异极显著(P<0.01),但发育率差异不显著(20.6%和23.3%)。实验表明,电脉冲能显著提高牛成熟卵母细胞的激活率;多次电激会造成很大比例的多原核,但对卵母细胞的发育影响不大。 相似文献
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