利用体内外成熟卵母细胞生产转TLR4基因抗病克隆绵羊的研究

研究旨在提高羊的抗病性能、生产培育高抗病力的转基因羊。本实验分别利用绵羊超数排卵获得的体内卵母细胞和体外成熟培养的卵母细胞作为核受体进行转基因克隆羊的生产。体内超排共获卵2 431枚,其中可用卵77.29%(1 879/2 431);体外成熟培养共获卵3 292枚,其中可用卵70.90%(2 334/3 292)。体内外核移植实验分别获得体内重构胚1 879枚、体外重构胚1 786枚。结果表明:体内核移植重构胚融合率(81.12%)显著性高于体外核移植重构胚(68.88%)(P<0.05);将部分体内、外重构胚以手术法分别移植于89只及72只受体,体内重构胚移植妊娠率为10.11%,显著高于体外重构胚移植妊娠率(2.78%)。体内、外重构胚移植后各产羔1只,PCR检测均为转TLR4阳性。本实验初步建立了一套较有效的体内外核移植生产转基因克隆羊的方法,并比较了不同来源卵母细胞对核移植效率的影响,发现体内超数排卵所获取的成熟卵母细胞数量、质量均优于体外成熟培养获卵。     

外源褪黑素对牛卵母细胞体外成熟的影响

 【目的】探索外源褪黑素（melatonin,MT）处理对牛卵母细胞体外成熟的影响从而优化牛体外胚胎生产体系。【方法】在牛卵母细胞成熟过程中添加不同浓度的MT,观察并统计其体外受精后胚胎的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数。应用放射免疫分析法检测血清、卵泡液和成熟培养液内MT与孕酮（P）、雌激素（E2)、促卵泡素（FSH）、促黄体生成素（LH）水平的变化并检测卵母细胞的活力和活性氧（ROS）的浓度。【结果】存在于牛卵泡液中的MT浓度与血清中的相近,添加10-11 mol•L-1 MT组的P浓度（2.01±0.33）ng•mL-1显著高于对照组（（0.87±0.10）ng•mL-1,P＜0.05）。与对照组（（67.32±7.30）%）相比,10-9 mol•L-1 MT组卵裂率显著提高（（77.81±7.06）%,P＜0.05）,并能提高囊胚率且囊胚细胞数（（29.61±9.55）%,（90.30±28.74）个）,显著高于对照组（（19.64±9.22）%,（75.07±25.98）个,P＜0.05）;同时,10-9 mol•L-1 MT组卵母细胞的活力高于对照组,并能降低卵母细胞内的ROS含量但没有显著差异（P＞0.05）。【结论】牛卵泡液中存在MT,适当浓度的外源MT能促进牛卵母细胞体外成熟。     

肉用黑萨福克绵羊超数排卵和配种授精方案的优化

本研究旨在优化肉用黑萨福克绵羊超排方案,筛选生产条件下最佳配种授精方式,提高黑萨福克体内胚胎生产效率,建立高效绵羊胚胎移植体系。供体超数排卵采用不同超排方案、不同FSH剂量、不同配种授精方式、不同侧卵巢超排效果、不同季节以及重复利用6组因素的比较试验。结果表明:采用CIDR+FSH+PMSG递减4d 8针注射法供体平均黄体数16.00个/只、可用胚数14.00枚/只和移植妊娠率71.43%,效果最好(P<0.05);FSH注射剂量范围在200²60 IU,超排平均黄体数、平均可用胚胎数分别为14.87、13.28枚/只,高于160260 IU,超排平均黄体数、平均可用胚胎数分别为14.87、13.28枚/只,高于160²00 IU组和260200 IU组和260³20 IU组(P<0.05);开膣器输精+自然交配+开膣器输精方法供体冲出卵子的受精率97.32%、平均可用胚数11.25枚/只,高于其他2种配种方式(P<0.05);不同侧卵巢超排效果无差别;繁殖季节(秋季)供体平均黄体数13.00个/只、可用胚10.75枚/只,高于非繁殖季节(P<0.05);重复超排效果无明显差异。本研究获得了黑萨福克绵羊超数排卵的技术参数,优化了黑萨福克绵羊超排方法和配种授精方案,建立了高效的胚胎移植体系。