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【目的】本研究旨在从金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus,以下简称金葡菌)处理奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cell,BMEC)上清中分离外泌体,探究金葡菌与BMEC数量比值(MOI)和处理后培养时间对外泌体总浓度的影响,并对金葡菌诱导BMEC释放的外泌体进行分离和鉴定。【方法】采用金葡菌临床分离菌株以MOI=1和MOI=10分别处理BMEC 3 h,对已处理的BMEC继续无外泌体培养9、12、24 h,同时设空白对照组,通过扫描电镜观察金葡菌处理对BMEC造成的超微结构损伤。采用超速离心法分离金葡菌诱导的BMEC上清液中的外泌体,分别用透射电镜、纳米颗粒追踪分析技术及Western blotting法对外泌体形态、颗粒大小和特异性标志蛋白进行分析鉴定。通过检测外泌体总蛋白浓度评估不同MOI和处理后培养时间对外泌体总量的影响,明确金葡菌诱导BMEC释放外泌体的最佳条件。【结果】通过扫描电镜观察发现,金葡菌处理BMEC后,细胞微绒毛脱落,细胞骨架破坏。透射电镜观察分离的外泌体为圆形的双层膜囊泡,直径在30~150 nm,形态均一。通过检测外泌体总蛋白浓度显示,在MOI=10时,培养9、12和24 h金葡菌诱导BMEC释放外泌体蛋白浓度均高于MOI=1,而培养12 h时释放外泌体蛋白浓度最高。对金葡菌诱导BMEC释放的外泌体进一步鉴定,其平均直径约为116 nm;Western blotting检测结果显示外泌体标记物CD9、CD81和TSG101表达阳性。【结论】本研究从形态学和分子生物学特征等方面证实获得的分离物为外泌体;金葡菌可以诱导BMEC释放外泌体,当MOI=10时,金葡菌处理细胞3 h后继续无外泌体培养12 h,收获的细胞上清中外泌体蛋白含量最高。 相似文献
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基于线粒体DNA D-loop序列分析彭县黄鸡遗传多样性及其起源进化关系 总被引:1,自引:0,他引:1
研究旨在探究彭县黄鸡的遗传多样性和起源。通过对30只彭县黄鸡线粒体DNA(mtDNA)D-loop区高变区部分序列的PCR扩增、测序和比对,结合Gen Bank已经测出D-loop区全序列的部分品种鸡的序列,探讨彭县黄鸡的遗传多样性和母系起源。结果表明:测出的高变区部分序列长度为504~506 bp,12只为504 bp(484 bp处T碱基缺失),1只为506 bp(498 bp处C碱基插入)外,其余均为505 bp。在30只个体中,共发现15处单核苷酸多态位点,由此界定7种单倍型。系统发育分析发现,彭县黄鸡7种单倍型可以分为A、B、C三个分支。综上,彭县黄鸡mtDNA D-loop区具有较为丰富的多态性,并且3个母系起源,研究结果从分子水平上为彭县黄鸡的遗传资源保护和开发利用提供了参考。 相似文献
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在语言的学习和运用过程中,不能不考虑情景的因素,但在英语听力课上情景常常被忽视,以至不能有效地提高学生的听力水平。情景在英语听力理解中具有重要作用,应充分利用语境线索,加深听力理解,从而提高英语听力课的教学质量。 相似文献
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文章从服装教学实践时设计茶艺服装入手,阐述了茶艺服装设计的研究可从获取设计灵感、研究茶艺服装的造型和茶艺服装的色彩、探索茶艺服装的面料选择,以及研究茶艺服装的配饰等方面进行. 相似文献
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刘子豪 《江西畜牧兽医杂志》2003,(1):19-19
<正> 1存在问题1.1冷配技术人员方面1.1.1技术尚不过硬。受胎率不高(徘徊在68%)是制约牛改工作的重要因素。1.1.2责任心不强,造成负面影响。冷配技术操作人员的报酬是:畜牧部门补贴一部分工资,养户交纳小部分手续费。有的技术人员在发现母牛没发情、假发 相似文献
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耕牛越冬后,一般体质膘度都有所下降,役力减弱,笔者通过在怀忠育肥场2年的实践,摸索出一些瘦弱老牛长膘复壮技术,现介绍如下,供同仁参考。1老弱牛壮膘技术(1)3~4kg姜黄,2.5kg糯米,煮熟后与白酒200g混合均匀,待凉温后喂牛,分3次喂服,每隔3d喂1次,连续服用1个月。(2)黄荆籽100~150g,炒熟后碾末,拌入饲料内喂老弱牛,连续喂给15~20d。2瘦弱牛壮膘技术(1)用炒黄豆和玉米各500g,加水磨碎后加入米糠或麦麸250g和少量食盐,搅拌混匀,每天待牛饲食草料后再喂,连喂7~10d。(2)白酒250g,红糖150g,每日1次,连续饮服10~15d。(3)猪油200g,鲜韭菜1kg,食… 相似文献
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国外水资源治理经验表明,在市场经济基础之上建立以法律制度为保障的水权制度,对水资源的高效配置和可持续利用有着十分积极的作用.由于我国水权制度正处构建与完善时期,因此厘清各部门政策的基本特征,为保障水资源产权权益和促进政策体系完善具有重要的现实意义.研究基于可持续发展体系建立驱动力-状态-响应(DSR)分析框架,梳理自2... 相似文献