北京规模化猪场病毒性腹泻隐性感染情况调查

为了解PEDV、TGEV和RV在猪群中的隐性感染情况,对北京市8个规模化养猪场开展流行病学调查.本次调查共采集到440份临床健康粪样,利用多重FQ-RT-PCR的方法进行检测,结果表明:PEDV、RV、TGEV的阳性率分明为14.1%、13.6%和3.2%;不同阶段的猪群中,PEDV在保育-育肥阶段阳性率最高,达到25.4%;RV在仔猪阶段阳性率最高,达到27.3%;TGEV在保育-育肥阶段阳性率为8.5%.由此可知,规模化猪场PEDV、TGEV和RV隐性感染情况较为严重.     

比较两种ELISA试剂盒在猪伪狂犬病血清抗体检测中的一致性

比较两种ELISA试剂盒检测结果的一致性,为流行病学调查和临床诊断筛选适合的商品化试剂盒。采用来自两个厂家的野毒抗体(gE)和免疫抗体(gB)ELISA检测试剂盒分别检测362份和392份猪血清,应用Kappa检验比较试验数据的一致性。结果显示:两种猪伪狂犬病抗体(g E)检测试剂盒联合检测出95份抗体阳性和256份阴性,符合率97.24%,结果一致性为极强(Kappa值0.932);两种猪伪狂犬病抗体(gB)检测试剂盒联合检测出351份抗体阳性和9份阴性,符合率91.84%,一致性为弱(Kappa值0.347)。以上结果说明,两种猪伪狂犬病抗体(gE)检测试剂盒都适用于PRV gE抗体检测,而两种猪伪狂犬病抗体(gB)检测试剂金差异较大,需慎重选择。     

表达H5亚型禽流感病毒HA基因重组火鸡疱疹病毒的构建

为构建表达禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组疱疹病毒(HVT),本研究将AIV A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的HA基因克隆于真核表达质粒中,构建了转移载体pUAB-gpt-HA。通过同源重组及霉酚酸筛选技术,将HA基因表达盒插入到HVT US10基因区,构建了一株表达H5亚型AIV HA基因的重组病毒HVT(rHVT-US10-HA)。经PCR、间接免疫荧光、western blot及红细胞凝集试验鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的HA蛋白。rHVT-US10-HA的构建为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。     

口蹄疫A-O-亚洲I型三联苗和O-亚洲I型二联苗+A型单价苗的免疫效果对比试验

本试验奶牛在相同的饲养管理条件下,分组免疫口蹄疫A-O-亚洲I型灭活三联苗(三联苗组)和O-亚洲I型灭活二联苗+A型单价苗(二联苗组),连续6个月监测抗体消长变化。结果表明,二联苗组产生的O型抗体和三联苗组相当;而亚洲I型和A型的平均抗体水平低于三联苗组,抗体持续时间也短于三联苗组;二联苗组A型、亚洲I型抗体合格率在免疫后5个月明显降低,两个试验组奶牛免疫前后产奶量变化均不显著。     

基因芯片技术及其在奶牛乳房炎病原微生物检测中的应用进展

本文介绍了基因芯片的概念、原理及应用情况，并以Lee建立的基因芯片技术为例介绍了奶牛乳房炎基因芯片的制备方法与应用情况。     

禽网状内皮增生症病毒gp90蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为获得分泌抗禽网状内皮增生症病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,通过表达pET32a-gp90重组蛋白,以纯化的gp90蛋白为抗原,免疫BALB/c鼠,筛选分泌抗REV McAb的杂交瘤细胞株.经过细胞的融合及筛选,共获得能稳定分泌抗REV gp90的McAb细胞系2株,分别命名为A9E8和B3F8.2株细胞培养上清的效价均在1:4×102以上,腹水效价均在1∶8×103以上.亚型鉴定结果表明,2株皆为IgG型,轻链均为k链;Western blot及间接免疫荧光结果显示,这2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能识别REV全病毒抗原,与其发生特异性反应,并且不与禽类其他病毒发生反应;病毒中和试验结果表明,获得的单克隆抗体均能REV临床分离株发生中和反应,具有较好的中和活性.利用制备的单克隆抗体建立了REV的间接免疫荧光检测方法,临床病料检测结果表明,该方法与病毒分离及PCR的检测结果基本一致,阴、阳性符合率分别为100％和90％.作者制备了针对REV gp90的McAb,为REV的快速诊断及抗原表位分析与鉴定等奠定了基础.     

我国猪伪狂犬病的最新流行动态与防控措施

文章重点分析了猪狂犬病的最新流行趋势和防控现状,针对该病流行新趋势、防疫存在的问题,提出了在伪狂犬病毒肆虐的情况下如何改善防治体系,如何加快对新型病毒的研究以及如何进行有效疫苗的研制。     

北京地区四个规模化猪场的猪链球菌病流行病学调查

本试验从北京地区四个规模化猪场的74头疑似猪链球菌病的仔猪组织中分离培养获得56株猪源链球菌,并进行了API 20 Strep生化鉴定、16S rRNA基因序列比对和药敏试验。试验结果表明:56株猪源链球菌分别属于粪肠球菌、屎肠球菌、鸟链球菌、马链球菌兽疫亚种、豕链球菌和猪链球菌,其中以兰氏D群粪肠球菌为主(23/56,41.07%),其次为兰氏C群马链球菌兽疫亚种(14/56,25.00%);对10种临床常用抗生素均产生了耐药性,耐药比例从12.50%至92.86%不等,对红霉素的耐药比例最高(52/56,92.86%),对新霉素的耐药比例最低(7/56,12.50%),且多重耐药性现象极为严峻。     

禽源U6启动子介导鸡马立克氏病病毒gI、gE基因特异siRNA的筛选及干扰活性鉴定

为筛选鸡马立克氏病病毒(MDV)gI、gE基因特异性siRNA,本研究以鸡胚成纤维细胞(CEF)的DNA为模板,扩增禽源cU6-3启动子序列,并合成针对gI和gE基因各5个靶位点的10条shRNA序列.通过重叠PCR将cU6-3启动子与shRNA融合扩增制备shRNA表达盒,将制备的shRNA表达盒分别与重组质粒pEGFP-gI或pEGFP-gE共转染CEF细胞,并根据荧光显微镜观察和流式细胞仪检测结果评价siRNA抑制融合荧光蛋白表达的效率.结果表明,gI和gE基因的抑制效率为10%～80%.分别将其中抑制效率最高的一条shRNA插入pGEM-T载体中构建重组表达质粒pcU6-shgI735和pcU6-shgE936,通过不同细胞系稳定干扰试验和抑制病毒复制试验评价其干扰活性.结果显示,pcU6-shgI735和pcU6-shgE936能够明显抑制融合蛋白的表达及MDV在CEF细胞中的增殖,并且禽源U6启动子构建的表达盒在禽源细胞(DF1)中的活性比在哺乳动物细胞(Vero、MDCK)的活性高1.21～1.45倍.本研究鉴定获得了gI和gE基因的特异性siRNA,筛选出能够抑制MDV复制的靶位点,为MDV基因的功能和抗MDV病毒研究奠定了基础.     

我国猪伪狂犬病的最新流行动态与防控措施

1伪狂犬病最新流行动态伪狂犬病病毒(PRV)是一个不可忽视的致病因子,造成伪狂犬病(PR)在全国大范围的传播流行,伪狂犬病病毒起到了推波助澜的作用,而且使猪病的感染流行复杂化。近年来一些猪场猪伪狂犬病免疫失败,猪伪狂犬病与其他疫病的混合感染不断涌现,使猪伪狂犬病的防控形势面临新的挑战。伪狂犬病并没有消失,而