卵母细胞体外成熟前生发泡(GV)异质性的研究进展

目前胚胎工程操作如胚胎体外生产、胚胎克隆等研究所需要的大量成熟卵母细胞主要是由卵母细胞体外成熟 (ＩＶＭ)提供的。尽管许多种动物的ＩＶＭ系统取得了很大的进展 ,但是还不十分完善 ,这在猪尤为突出。例如猪ＩＶＭ -ＩＶＦ系统生产的猪胚胎发育能力很低 ,最多也只有 2 0 %发育到囊胚阶段 ,ＩＶＭ/ＩＶＦ胚胎移植后发育到期的比率也只有 5 %～10 %。目前还不十分清楚导致发育率低的特定原因。就用于体外成熟的卵母细胞来源而言 ,通常应用初情期前母猪中等大小卵泡内的未成熟卵母细胞 ,这些卵泡与排卵卵泡的生理状态有很大的不同 ,或者从…     

猪胎儿成纤维细胞制作方法的改进及应用

实验以猪胎儿为研究材料 ,对胎儿成纤维细胞的分离与培养方法进行改进 ,采用室温消化的方法制作猪胎儿成纤维细胞。结果表明 ,室温消化方法的细胞获得量 ,细胞活力和贴壁细胞的形态均优于常规的热消化方法 ,而且操作简单 ,速度快     

金黄地鼠超数排卵的研究

采用孕马血清促性腺激素和人绒毛中性腺激素对成年雌性金黄地鼠进行超数排卵研究。结果表明：４０ＩＵＰＭＳＧ＋４０ＩＵＨＣＧ剂量组合的超排效果优于３０ＩＵＰＭＳＧ＋３０ＩＵＣＧ剂量组合;     

上游处理方法对山羊精子活力影响研究

通过延长精子上游时间的方法研究了该处理过程中影响精子活力的几个因素。主要结果如下：１、不同的培养液对上游后的精子活力有影响;２、不含白蛋白（ＢＳＡ）的培养液不适于精子的上游处理;３、肝素浓度增加,上游处理后精子活力有所下降;４、山羊精（子）液在室温（２２℃）和低温（４℃）条件下至少可以保存２ｈ,上游处理后精子活力未受到明显影响,但保存时间长于２ｈ,上游处理后精子活力有所下降     

小鼠获能精子体外短期保存的初步研究

本实验以小鼠为实验动物 ,检测已获能精子在 4℃、 2 4℃保存能否维持其受精能力 ,以期为家畜的体外受精提供有益参考。结果表明 :1) 2 4℃保存的精子受精率明显高于 37℃和 4℃保存的精子 (P <0 0 5 ) ;2 ) 2 4℃保存的精子浓度增加 ,其受精率明显增加 (P <0 0 5 ) ;3)获能精子于 2 4℃、 5 %CO2 和空气保存 2 4h ,其受精率没有明显差异 (P >0 0 5 ) ;4 )获能精子于 2 4℃保存 5 %CO2 2 4、 4 8和 72h后的体外受精率有明显的差异 (P <0 0 5 )。     

玻璃化冷冻前平衡及解冻后恢复处理对卵母细胞质量的影响

以小鼠为动物模型，研究了玻璃化冷冻前的平衡和解冻后的恢复处理对卵母细胞质量的影响程度。结果表明：1）无论是受精卵还是卵母细胞，其集聚FDA（乙酰荧光素）没有明显差异，可以用其检测卵母细胞活力；2）在产销认中添加CB组的卵母细胞细胞膜完整率与CB组没有明显差异；但是明显低于对照组。3）恢复处理在无CB时对卵母的激活作用并不明显，虽然活化率有一定的提高，但是添加CB组的卵母细胞激活率却明显增加，但是激活的类型多是排出第二极体，形成原核的比率很低。     

次黄嘌呤对小鼠卵母细胞成熟的抑制作用

试验以小鼠为试验动物,研究了次黄嘌呤(HX)对小鼠卵母细胞减数分裂恢复抑制作用,以期更好地掌握小鼠卵母细胞的成熟机制,提高卵母细胞成熟效率。研究表明,①HX能有效地抑制卵母细胞发生生发泡成熟;②HX作为抑制剂对裸卵成熟的抑制作用是可逆的;③在生发泡抑制期间,卵母细胞胞质并没有成熟。结果显示,次黄嘌呤是一种有效的生发泡破裂抑制剂。     

乙酰荧光素(FDA)在小鼠和猪卵母细胞活力评价上作用

以小鼠卵母细胞和猪卵母细胞为材料研究了FDA活力检测上的应用。结果表明：1)受精卵和卵母细胞均有积聚FDA(乙酰荧光素)的能力；2)猪卵巢在不同温度保存之后，其卵母细胞的积聚FDA(乙酰荧光素)的能力有明显改变。这些结果表明，可以用积聚FDA(乙酰荧光素)的能力检测卵母细胞的活力。     

注射hCG后不同时间猪所排卵泡内COC的形态和卵母细胞减数分裂进程

研究了超排处理注射 h CG后不同时间猪卵丘卵母细胞复合体 (COC)的回收率和形态、卵母细胞减数分裂进程以及 COC形态与生发泡 (GV)染色质构型之间的关系。结果表明 :(1)注射 h CG后 4 h COC的回收率为 5 3.1% ,明显低于注射 h CG后 18、2 2、2 4 h(71.2 %、76 .5 %、70 .0 % ,P<0 .0 5 ) ;(2 )注射 h CG后 18、2 2、2 4 h收集的 COC分别有98.9%、98.0 %、91.4 %的卵丘已经发生扩展 ,而注射 h CG后 4 h收集的 COC则无一发生卵丘扩展 ;(3)注射 h CG后 4h,有少量卵母细胞开始恢复减数分裂 ,至 18h左右开始发生生发泡破裂 (GVBD) ,到 2 2～ 2 4 h有 5 8.4 %～ 6 0 .0 %的卵母细胞发生 GVBD;(4)外层卵丘扩展、放射冠轻微扩展的卵母细胞处于 GV- 1期的比例 (6 9.6 % )明显高于卵丘完全扩展的卵母细胞 (47.8% )和放射冠部分扩展、卵丘已经脱落的卵母细胞 (2 9.3% ) ,而后 2者发生 GVBD的比例(40 %、4 4 % )则略高于前者 (2 7% )。     

低温和冷冻保护剂(DMSO)对卵细胞的影响

实验以小鼠为动物模型 ,研究延长小鼠卵母细胞在含有冷冻保护剂的液体中的平衡时间、并且降低平衡时的温度是否能影响卵母细胞完成减数分裂时染色体的倍性。结果表明 :①在含有DMSO的液体中平衡卵母细胞的非整倍体率同对照组没有明显差异 ,但是卵母细胞在没有DMSO的液体中平衡 ,非整倍体率明显增加 ;②有DMSO时 0℃平衡15和 6 0min后卵母细胞非整倍体率没有发生明显变化 ;③卵母细胞在 1.5mol/L的DMSO液体中 2 4℃平衡 ,卵母细胞的非整倍体率明显增加。这些结果表明 :1.5mol/L的DMSO 0℃平衡对卵母细胞的染色体倍性有保护作用