一株利福平高耐受鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及基因组分析

鸭疫里默氏杆菌(RA)为一种可引起鸭、鹅、鸡、火鸡等禽类急性或慢性败血症的革兰氏阴性菌,是鸭场重要病原菌之一。本研究利用鸭疫里默氏杆菌三重PCR鉴定方法,从养殖场病鸭的脏器中分离、鉴定出一株鸭疫里默氏杆菌,将其命名为RA-WH9;通过血清型鉴定实验和Kirby-Bauer药敏实验,确定了其血清型和药敏性;利用细菌基因组三代测序技术和生物信息学平台,我们构建并分析了RA-WH9基因组完成图。结果表明,RA-WH9为1型血清型鸭疫里默氏杆菌,对氨苄西林、多粘菌素B和利福平等抗生素耐药,其对利福平最小抑菌浓度达到50 μg/mL。全基因组序列分析表明,RA-WH9染色体总长度为2 488 018 bp,GC含量34.58%,编码2563个基因,其中包含88个耐药基因,其耐药基因型与耐药表型一致。此外,RA-WH9携带一个全长10736 bp的质粒。本研究丰富了鸭疫里默氏杆菌的基因库,为鸭疫里默氏杆菌病的防控提供了依据。     

Ⅰ型鸭肝炎病毒SH株全基因组序列测定与分析

本研究从上海市某鸭场发病鸭群中分离到1株DHV-1型强毒株,对其进行毒价测定、琼脂扩散试验和动物回归实验,结果显示：按103.41 ELD50/0.2 mL接种1日龄雏鸭,该毒株对雏鸭有明显的致病性,死亡率为60%,肝脏病变率为100%。经全基因组测序显示：该毒株长度为7652 nt,含626 nt的5＇非编码区和314 nt的3＇非编码区,编码一个2249 aa大小的多聚蛋白。根据Blast比对发现,该毒株属于经典的DHV-1A群,与韩国经典强毒株R85952（99.7%）和中国分离强毒株HP-1（99.3%）的同源性最高。     

单克隆抗体夹心ELISA试验检测鸡新城疫病毒抗原的研究

从10株抗鸡新城疫病毒(NDV)特异性单克隆抗体(MAbs) 中筛选出2株MAbs—M22和F23,分别用作包被抗体和酶标抗体而建立的MAbs—夹心ELISA试验,对提纯NDV的最小检出量为25ng/ml病毒蛋白.NDV鸡阳性血清对本试验的特异性阻断作用和与其他禽类病毒交叉反应的阴性结果,证明本试验对NDV的特异性。从临床疑为鸡新城疫的724只病鸡的口腔棉试样品中共检出阳性502只,其中200个样品与病毒分离试验结果完全一致,两者均查出阳性鸡176只。     

单一血清稀释度ELISA定量检测鸡新城疫抗体水平的研究

建立了—种以单一血清稀释度定量检测鸡血清中 NDV抗体的间接 ELISA 方法,经试验得出回归方程 LnET=5.878 0.537P/N。该方法特异性强,能被 NDV 单抗所特异性阻断,比 HI 方法敏感。通过对 SPF 鸡等进行的不同疫苗免疫前、后抗体动态测定表明,ET 值与 HI 值之间呈一定的相关性(r=0.8702),强毒攻击试验表明,ET值>4000时鸡群能得以保护,装配成的商品试剂盒保存期长达6个月.     

流产布鲁菌LysR家族转录调控子LTTR8缺失株的构建及其生物学特性分析

布鲁菌是一种重要的人畜共患病病原,兼性胞内寄生,无典型毒力因子,毒力相关基因的研究对阐明布鲁菌持续感染的机制具有重要意义。本研究以流产布鲁菌S2308为亲本株,通过同源重组的方法,构建流产布鲁菌LysR家族转录调控子基因bab＿RS24670缺失株ΔlttR8,基于广宿主质粒pBBR1MCS构建成互补株ΔlttR8-Com。免疫印迹试验表明：ΔlttR8为光滑型菌株;体外培养分析发现lttR8缺失不影响布鲁菌的生长;细胞感染试验发现lttR8缺失不影响布鲁菌黏附、入侵细胞和胞内存活的能力。耐受性试验分析发现：lttR8缺失不影响布鲁菌对过氧化氢（H2O2）和多粘菌素B(polymyxin B)的敏感性。小鼠感染试验分析发现lttR8缺失显著减弱流产布鲁菌的毒力。综上所述,本研究发现一个新的与流产布鲁菌致病性相关的转录调控子,为布鲁菌致病机制研究提供参考。     

鸡霍乱口服弱毒疫苗的研究

用经过选择的禽多杀巴氏杆菌自然弱毒菌株Ｒ１－２３菌株制成的鸡霍乱固体培养口服弱毒疫苗，其安全剂量接近于２００个免疫剂量。该口服苗两次饮水免疫的最适总剂量为每羽５０亿个活菌，最佳间隔时间为４８小时。免疫鸡第二次饮苗后第３天即可产生较好的免疫保护率（７／８）。免疫鸡对异型强毒株Ｐ１０５９（８∶Ａ）、Ｐ２７２３（９∶Ａ）和同型强毒株Ｃ４８－１（５∶Ａ）滴鼻攻击的近期保护率平均为５／１０、６／１０和９／１０。６个月免疫期的平均保护率为７６．７０％（４６／６０），一万多羽鸡田间试验结果表明，免疫后２个月的平均保护率为９３．１０％（２７／２９），６个月的平均保护率为７３．５０％（２５／３４），除对产蛋率有轻度影响（下降１．２７％）外，无其它不良反应。野外大面积使用结果表明，该口服苗不但性能稳定，免疫原性优良，而且安全可靠，适用于鸡口服免疫。     

将来的禽用疫苗

在过去的40年中,大多数重要的禽病都可以用相应的疫苗进行有效的预防,极大地减轻了疾病带来的损失,疫苗已成为控制禽病的基础。然而人们希望进一步降低生产成本,提高产品质量,这对改进现有疫苗和开发新型的生物制品将具有极大的推动作用,其中因变异株及超强毒株的出现而造成疫苗效果的逐渐降低,也为促使新型疫苗的研制以强大推动。以重组DNA技术研究古典型和新型疫苗空前活跃,新型生物制品必将大批涌现出来。     

硝酸纤维素膜免疫吸附法纯化鸡IgM的研究

以抗鸡ＩｇＭ单抗包被硝酸纤维素膜，小牛血清封闭非结合点，吸附鸡ＩｇＭ后，以硫氰酸钾解吸．收集解脱液，透析后即为纯化ＩｇＭ．其比活性为８２．３％，每次可获得１．２５ｍｇＩｇＭ纯品．膜可反复使用．     

广东规模化鸡场死鸡胚中鸡毒支原体的分离鉴定、致病性及药物敏感性

旨在从广东某规模化鸡场死鸡胚进行鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)的分离,并进行遗传进化分析、致病性及药物敏感性研究。本研究从广东某规模化鸡场的带菌死胚卵黄组织中分离禽支原体,通过菌落观察、血清学试验、16S rRNA支原体通用引物序列鉴定等方法,对分离的菌株进行种属鉴定,同时将分离的毒株对鸡胚和SPF鸡进行攻毒试验及抗菌药物敏感性试验。结果显示：显微镜下菌落呈典型的“荷包蛋”状。平板凝集试验显示其与MG阳性血清有凝集反应,与MS阳性血清不反应;16S rRNA序列测序发现各分离株与MG相似性达99.9%,因此确定分离株为MG。将各分离株感染7日龄SPF鸡胚,结果显示感染鸡胚大多于临近出壳时死亡;感染3周龄的SPF鸡,3周后解剖发现鸡气囊发生显著病理变化,说明其具有较强致病力;药物敏感性试验结果显示,5株分离株对盐酸沃尼妙林、多西环素、泰万菌素及泰妙菌素有较高敏感性,对替米考星、泰乐菌素、恩诺沙星、红霉素、吉他霉素、林可霉素呈现出不同程度耐药性。综上,从广东某规模化鸡场死鸡胚中成功分离到5株MG分离株,各分离株均可引起红细胞凝集,导致鸡胚死亡,对SPF...     

应用PAPD方法对鸡败血霉形体DNA多态性的研究

用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）方法,通过筛选的５个随机引物（ＯＰＨ－０２,ＯＰＨ－０５,ＯＰＨ－０７,ＯＰＨ－１３,ＯＰＧ－１６）,对１４株鸡败血霉形体（ＭＧ）国际标准株和国内分离株进行了ＤＮＡ多态性研究。结果表明,５个引物共产生２１种条带,其中有３个条带分别为２个菌株所特有,扩增产物片段的长度在１５０～４５００ｂｐ之间,所有菌株均有１条共同条带,以ＯＰＨ－０５扩增产物的多态性最丰富。根据样品ＤＮＡ所获得的菌株间相似性指数表明,Ｄ９６０３与Ｄ９６０７相似指数最高,Ｓ６,Ｋ３９１３和Ｄ９６０４三者相互间相似性指数最低。提示ＲＡＰＤ方法可用于霉形体遗传标记的分析。