一步法RT-PCR检测禽呼肠孤病毒方法的建立与应用(摘要)

禽呼肠孤病毒(ARV)是呼肠孤病毒属的成员,在临床上主要引起鸡病毒性关节炎/腱鞘炎、吸收障碍综合症等多种疾病.禽呼肠孤病毒感染导致鸡群的饲料报酬降低、生产能力下降、屠宰废弃率高和引起免疫抑制而造成其它疾病的并发或继发感染,使鸡群死亡率升高,其危害相当严重.     

广西开展动物卫生监督执法规范年活动的成效与存在问题和整改建议

2008年,根据<农业部关于开展全国动物卫生监督执法规范年活动的通知>(农医发[2008]6号)要求,我区及时启动实施动物卫生监督执法规范年活动(以下简称执法规范活动)仪式.迅速成立领导机构和工作机构,制定具体工作实施方案,认真组织抓好我区执法规范年活动各项工作的落实.圆满完成了各项目标任务,取得了较好成效,得到农业部考核验收组的肯定和好评.     

应用RAPD技术分析禽多杀性巴氏杆菌广西分离株的DNA多态性

应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术，以随机引物单条或成对组合的方式对9株禽巴氏杆菌(PM)广西分离株和3个参考株的DNA进行了多态性分析。结果显示，在选用的20个引物中，有4对引物(4条引物成对组合)扩增的条带为1～16条，其长度在90～2600bp。相似指数分析显示，PM广西分离株GX2与GX4的相似指数最高，为0．97；GX7与B26T1200的相似指数最低，为0．21，C48—1标准强毒株与PM广西分离株间的相似指数为0．33～0．64。表明广西当地的流行株呈现多样性，与PM标准强毒株存在差异。     

二温式多重RT-PCR快速检测对虾TSV和IHHNV的研究

分别针对桃拉综合征病毒（TSV）基因、传染性皮下和造血器官坏死病毒（IHHNV）基因,设计了2对特异性引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了快速检测TSV和IHHNV的二温式多重RT-PCR技术.特异性和敏感性试验结果表明,该技术只对TSVRNA和IHHNVDNA进行扩增,分别得到1条231bp的TSV特异性cDNA扩增片段和1条356bp的IHHNV特异性DNA扩增片段,对其它对虾病原核酸的扩增结果为阴性,该技术最低能同时检测到10pg的TSVRNA和IHHNVDNA,具有高度的特异性和敏感性.临床应用试验证明,该技术可以用于对虾养殖业中TSV和IHHNV的快速检测和鉴别诊断.     

锐劲特及其混用防治水稻二化螟的田间试验效果

近年来,二化螟不但危害逐年加重,而且对常规药剂均已产生抗药性.试验结果表明,防治二化螟效果以锐劲特450ml/hm2、锐劲特225ml/hm2+三唑磷750ml/hm2、锐劲特225ml/hm2+阿维菌素300ml/hm2为好,适期用药一次,对二化螟的杀虫和保苗效果可达90%以上,2006年大面积应用也证明了这一点;而不宜选用杀虫单及其复配剂、乙酰甲胺磷及其混用.在二化螟中等以下发生时,可选用锐劲特225ml/hm2+乙酰甲胺磷1350ml/hm2防治二化螟,兼治纵卷叶螟、稻飞虱,从而起到总体防治水稻多种害虫的效果.     

锐劲特与毒死蜱混用防治水稻稻飞虱效果的评价

针对稻飞虱发生重、对吡虫啉类药剂产生抗药性的情况,进行了锐劲特与多种速效药剂混用防治稻飞虱试验,从而明确了锐劲特与毒死蜱混用防治稻飞虱效果好、持效期长,是防治稻田稻飞虱、纵卷叶螟和二化螟等多种害虫理想的药剂配方,值得在水稻主要害虫总体防治上推广应用.     

PCR和多重PCR技术对人工感染鸡毒支原体SPF鸡样品的检测

应用聚合酶链式反应(PCR)和多重PCR技术对人工感染鸡毒支原体(MG)SPF鸡的样品进行检测，在第1～24d，所采集喉头及腭裂处粘液、喉气管组织、肺组织均可检出MG，阳性检出率要比传统分离鉴定方法高。在整个试验期不同样品的MG分离、PCR和多重PCR对样品(喉头腭裂粘液、喉气管、肺、气囊膜)的检出率分别为70％、81．3％、76．7％。试验结果表明了PCR和多重PCR对MG的检测不仅特异、敏感、快速，而且操作简便．对阳性样品检测的符合率100％，十分适合在临床上推广应用。     

三种对虾病毒多重实时荧光PCR检测方法的建立

根据基因库中白斑综合征病毒（WSSV）、传染性皮下及造血器官坏死病毒（IHHNV）和桃拉综合征病毒（TSV）的基因序列,设计了WSSV 、IHHNV和TSV的三对特异性引物和三条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了能够同时检测WSSV 、IHHNV和TSV的三重实时荧光PCR方法。该方法特异性好,对WSSV 、IHHNV和TSV的检测敏感性分别达到20000、20和20000个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对WSSV 、IHHNV和TSV不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测这三个病毒。对保存的45份经常规PCR检测仅为WSSV 、IHHNV和TSV阳性的样品进行二重实时荧光PCR检测,结果都为阳性,其中2份为WSSV和IHHNV混合感染。本研究建立的三重实时荧光PCR方法用于WSSV、IHHNV和TSV的检测具有特异、敏感、快速、定量等优点。     

应用RT-PCR检测人工感染鸡体内禽呼肠孤病毒的动态分布

应用一步法反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测禽呼肠孤病毒(ARV)在人工感染SPF雏鸡体内的动态分布情况。结果3日龄感染ARVS1133毒株后,12h就可以从关节、肝、脾等组织中检出病毒的RNA,感染后3—7天为检出的高峰期,至感染后27天还可从附关节组织检测到：在11种不同绀织中．均不同程度地检测到病原的核酸,其中以关节组织检出率最高(80．9%),其次为肝(67．6%)、脾(55.9％)、肾(50．0％),肛门棉拭子的检出率最低(13．2％),显示了ARV在感染机体内的动态分布情况。     

2000～2004年间广西新城疫病毒强毒株的分离与鉴定

近年来从广西不同地区规模化鸡场的13个肉鸡群病死鸡中分离到13株有血凝性的病毒,这13株病毒的血凝性均能被新城疫标准阳性血清抑制,经过血凝(HA)试验、血凝抑制(HI)试验和RT-PCR检测结果确定为新城疫病毒.13株病毒的生物学特性测定实验结果证明该13株病毒均为新城疫病毒强毒株.