哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

哺乳动物胚胎的超低温保存技术对于动物种质资源的保存和良种家畜的国际交流具有重要意义,是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等胚胎生物技术不可分割的组成部分。1972年,英国学者Whittingham等人首次利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功。此后许多学者对冷冻方法进行了广泛的研究。然而,在胚胎冷冻和解冻过程中都存在许多会使胚胎受到损伤的因素,如:抗冻保护剂的毒性,冷冻损伤,细胞内冰晶的形成,破裂损伤,渗透压引起的膨胀。因此,使用不同的冷冻和解冻法应避免或减少胚胎受到损伤,以提高胚胎解冻后的存活率。1抗冻保护剂和冷冻溶液在哺乳…     

从罗氏沼虾肝胰腺转录组角度阐述罗氏沼虾对动植物蛋白利用的差异

为了探究罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii）对动植物蛋白利用的差异,从肝胰腺转录组角度出发,采用IlluminaHiSeqTM4000高通量测序平台对罗氏沼虾肝胰腺组织进行转录组测序。然后将所测序列经质控,组装后对比到GOKEGG等数据库中进行注释（梁华芳等,2013）,并对其进行差异基因等的聚类分析。试验将健康的初始均重为0.448g的罗氏沼虾分为两组,分别以鱼粉为动物蛋白源（FP组）,豆粕、玉米蛋白粉和谷朊粉为植物蛋白源（PP组）进行饲喂,每组3个重复,养殖周期为8周。结果显示,两组样本6个样品共产生160783350个Cleanreads,分别对两组样本6个样品进行两两比较,一共检测到518个差异表达基因,其中显著上调基因有460个,显著下调基因有58个,GO功能分析表明,差异表达的基因对比到GO数据库共37098个GOterm,这些term分别对应细胞组分,分子功能以及生物过程等三大类59个分支,差异基因主要涉及到糖类转运、氨基酸合成、酶活性细胞膜组成等。通过KEGG富集分析结果表明,两组样本之间的差异表达基因主要富集在139条通路上,主要涉及代谢、遗...     

OPS法玻璃化冷冻兔胚胎的研究

采用2种不同浓度的冷冻液(VSⅠ和VSⅡ),通过OPS法玻璃化冷冻兔的胚胎。结果表明:冷冻兔的桑椹胚641枚,解冻后胚胎总回收率为93.8%(601/641),形态结构良好率为94.5%(568/601),透明带完好率为100%(601/601)。VSⅠ和VSⅡ冷冻的胚胎解冻后回收率分别为93.8%(305/325)和93.7%(296/316),两者差异不显著(P>0.05);形态良好率分别为95.1%(290/305)和94.0%(278/296),前者显著地高于后者(P<0.05)。将解冻后形态结构良好的桑椹胚415枚移植到29只受体母兔体内,总妊娠率为51.7%(15/29),产仔率为34.5%(61/177)。VSⅠ妊娠率为53.3%(8/15),产仔率为36.8%(35/95);VSⅡ妊娠率为50.0%(7/14),产仔率为31.7%(26/82)。无论妊娠率还是产仔率,VSⅠ都高于VSⅡ,但差异不显著(P>0.05)。     

哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

哺乳动物胚胎的超低温保存技术不仅为动物种质资源的保存和良种家畜的国际交流提供了简单的手段，而且还是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等胚胎生物技术不可分割的组成部分。1972年，英国学者Whittingham等人首次利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功，此后许多学者对冷冻方法进行了广泛的研究。至今，牛、绵羊、山羊、马、兔子、猫、羚羊、狒狒、狨猴、猴和人等的胚胎冷冻保存也获成功。然而，在     

中国大白兔的超数排卵效果比较

采用国产FSH和德国产PM SG对58只中国大白兔进行超数排卵试验。结果表明:①两种激素超排均有较好的效果,FSH组平均排卵点和平均回收胚胎数分别为285±180个、225±132枚;PM SG组分别为270±119个、236±98枚,经t检验,两者差异不显著(p>005),但从超排母兔回收胚胎的分布情况看,PM SG组的超排效果更稳定些。②右侧卵巢排卵数无论是FSH组(537%)还是PM SG组(505%)均高于左侧卵巢(分别为463%和495%),FSH组左、右侧卵巢排卵数差异极显著(p<001),PM SG组差异不显著(p>005)。③两种激素在春季对母兔的超排效果都明显优于秋季(p<001)。     

新西兰白兔超数排卵效果的研究

超数排卵简称"超排",是以各种外源性促性腺激素诱发动物卵巢的许多卵泡发育并排出具有受精能力的卵子的过程.通过对实验动物进行超数排卵,可以一次性获得比正常情况下排出多数倍的成熟卵母细胞,受精后获得处于不同发育阶段的胚胎,不仅能开发利用卵巢上的卵母细胞资源,而且能提高优良母畜的繁殖能力,对加速品种改良和提高动物繁殖率都具有重要意义.     

L-谷氨酰胺、BSA对家兔卵母细胞体外受精及受精卵体外发育的影响

目前,体外受精技术在治疗人类不孕症以及提高动物繁殖率和优秀母畜繁殖力等方面已成为一种有效手段.笔者以家兔为试验动物,探讨L-谷氨酰胺、牛血清白蛋白(BSA)对家兔卵母细胞体外受精及受精卵体外发育的影响,旨在更好地了解整个受精过程的生理机制,为畜牧业生产提供更多的胚胎来源与相关技术.     

第28期鸡胚原始生殖细胞的分离培养

[目的]进一步优化生殖细胞（PGCs）细胞体外培养条件。[方法]从第28期（5．5d）鸡胚生殖嵴分离PGCs,将PGCs与性腺基质细胞共培养进行原代培养,比较2种培养温度和3种培养浓度对PGCs原代培养的影响,以及2种饲养层细胞对PGCs传代培养的影响,并通过倒置显微镜下形态学观察、碱性磷酸酶（AKP）和过碘酸希夫反应（PAS）染色方法鉴定PGCs。[结果]培养浓度为2．5×10^5个／ml和培养温度为37℃时PGCs增殖较多,不易分化,存活能力较强,以第2代鸡胚成纤维细胞作饲养层时传代培养效果较好,获得了PGCs增殖的未分化集落,为后期的细胞标记及移植研究提供了较多数量和较高活力的PGCs。[结论]获得了PGCs原代与传代培养较好的培芥体系,为禽类EG细胞系的建立和转基因研究奠定了基础。     

花生四烯酸对日本沼虾肝胰腺细胞脂质代谢基因表达的影响

本试验旨在评价细胞培养液中花生四烯酸(arachidonic acid,ARA)浓度对日本沼虾肝胰腺细胞活力及脂质代谢相关基因表达的影响。分离日本沼虾肝胰腺细胞,使用M199完全培养液培养5 d后换成含ARA的培养液,ARA浓度分别为0(ARA1)、50(ARA2)、100(ARA3)、200(ARA4)和1 000μmol/L(ARA5),测定12和24 h时脂质代谢相关基因的表达水平,以及24h时细胞活力。结果表明:原代肝胰腺细胞使用完全培养液时,生长状况良好,能存活15 d左右;ARA5组24 h时细胞活力显著低于ARA1和ARA2组(P0.05);高浓度的ARA降低了12和24 h时Δ4脱饱和酶(Δ4 FAD)、Δ6脱饱和酶(Δ6 FAD)、碳链延长酶6(Elovl6)、B类Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ)、脂肪酸结合蛋白10(FABP10)、乙酰辅酶A结合蛋白(ACBP)基因表达水平;ARA作用12 h时,ARA2组SR-BⅠ基因表达水平显著高于其余各组(P0.05),ARA2和ARA3组FABP10基因表达水平显著高于ARA1和ARA5组(P0.05),ARA3组ACBP基因表达水平显著高于其余各组(P0.05);ARA作用24 h时,ARA2组SR-BⅠ、FABP10和ACBP基因表达水平显著高于其余各组(P0.05)。由此可见,细胞培养液中ARA浓度会影响日本沼虾肝胰腺细胞活力及脂质代谢相关基因的表达,过高的ARA浓度(1 000μmol/L)会降低细胞的活力,适宜的ARA浓度(50~100μmol/L)可促进脂肪酸脱饱和酶、碳链延长酶及脂肪酸转运相关基因的表达。     

精原干细胞的分离纯化方法

精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs)是永久分化成精子细胞的克隆源, 既可以自我更新生成新的干细胞,又可以增殖分化形成各阶段的生精细胞直至成熟的精子. 由于精原干细胞可以进行体外培养、转基因操作、异体或异种移植重塑精子发生,以及可以 冷冻保存,所以在雄性不育治疗、转基因动物生产、遗传资源保护等方面有着广阔的应用前 景,成为新的研究热点.SSCs的分离富积是对其研究与应用的必要前提条件.然而,SSCs在 睾丸中所占比例极低,选择有效的分离纯化方法,获得富积的SSCs就成为推动其研究的关键 步骤.近年来,随着SSCs移植功能试验的建立,有关SSCs的分离纯化研究取得了长足进步,本文就此作一综述.