非典型肺炎--考验人类的一场攻坚战

根据世界卫生组织网站统计,我国称为非典型肺炎的严重急性呼吸综合征(Severe AcuteRespiratory Sydrome, SARS)已经在30个国家和地区发生.从2002年11月1日至2003年5月5日日内瓦时间18:00,全球累计报告病例6583例,死亡病例461例,治愈出院病例2764例.……     

牛流行热病毒灭活疫苗免疫后牛外周血淋巴细胞亚类分布的研究

对牛流行热病毒灭活疫苗免疫并攻每后，牛外周血淋巴细胞亚类的变化进行了研究。结果表明，灭活苗免疫后，牛的CD4^ 显著升高，可能与参与辅助B淋巴细胞合成抗体有关，攻毒后，γδT细胞均显著上升，免疫组在攻毒后3周仍保持在相当的高水平，IL－2Rα阳性细胞在攻毒后高热期也有显著升高，而CD8^ 细胞没有明显变化。     

1.1kb、2.7kb、3.0kb鸡输卵管组织特异性启动子的克隆及细胞评价

鸡卵清蛋白基因启动子是指导外源基因高效特异性表达的理想调控区,利用卵清蛋白启动子驱动外源蛋白大量表达,需要包含组织特异性相关序列。本研究以海兰白鸡的基因组为模板,采用PCR扩增了1.1 kb、2.7 kb和3.0 kb的卵清蛋白启动子区,置换pcDNA6.2-GFP中CMV启动子序列,构建了真核表达载体pOV1.1 kb-GFP、pOV2.7 kb-GFP、pOV3.0 kb-GFP;转染原代输卵管上皮细胞和中国仓鼠卵巢细胞(CHO),PCR、RT-PCR证明重组载体能够整合到细胞基因组内,并进行转录;倒置荧光显微镜下观测到绿色荧光蛋白表达;启动子表达效率由高到低依次是CMV启动子、1.1 kb、2.7 kb、3.0 kb卵清蛋白启动子。研究结果为瞬时表达模型的建立和输卵管生物反应器的研究奠定基础。     

含LacZ重组逆转录病毒的制备及其在NIH3T3细胞的表达

构建了含有3．7kbLacZ的重组逆转录病毒载体,转染包装细胞系PA317后,经G418筛选,得到了G418的抗性的产毒细胞系,用收获的含有重组逆转录病毒粒子的浓缩病毒上清,感染NIH3T3细胞。经X-gal染色检测,发现表达了LacZ的NIH3T3细胞呈蓝色。     

禽流感病毒A/PFV/Restock/34(H7N1)HA基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/PFV／Restock／1／34（H7N1）1．7kbHA基因的cDNA，将其克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后，亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis，筛选到重组质粒命名为pBlueBacHisH7HA，测序正确后与线性化的杆状病毒DNA（Bac-N-Blue^TMDNA）共转染sf9昆虫细胞，挑取蓝色蚀斑，经三轮蚀斑纯化，获得数株重组杆状病毒rpBlueHisH7HA。提取重组病毒DNA，经PCR证明目的基因片段已插入到杆状病毒基因组中，血凝实验、SDS-PAGE和Western blot实验结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得了表达。     

马白细胞介素18成熟蛋白(mEIL-18)基因在大肠埃希氏菌中的高效表达与纯化

用RT—PCR从经ConA刺激的马外周血单个核细胞（PBMC）中扩增出马白细胞介素18（Equine interleukin-18，EIL-18）前体蛋白（precursor EIL-18，pEIL-18）基因的cDNA，然后克隆至载体pCR2．1-TOPO中，鉴定并命名为pCR2．1-pEIL-18。自pCR2．1-pEIL-18中扩增马白细胞介素18成熟蛋白（mature EIL-18，mEIL-18）基因，并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a（＋）中。将筛选出的阳性克隆进行测序、诱导表达并纯化其表达产物。结果表明，mEIL-18基因全长474bp，含1个开放阅读框，编码157个氨基酸的成熟蛋白；表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在，经SDS-PAGE和Western—blot分析，重组蛋白相对分子量约为20ku，且具有免疫生物学活性。mEIL-18基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下采用Ni^＋亲和层析纯化方法获得了高纯度的重组mEIL-18，为探究马白细胞介素18的生物学活性及其应用奠定了基础。     

基于生态足迹的雅安市土地生态安全研究

以雅安市1999-2006年的统计数据为基础,利用生态足迹理论与方法,对雅安市的生态足迹、生态承载力、生态赤字进行了研究,对雅安市的生态安全情况进行了评价.结果表明:雅安市人均生态足迹从1999年的1.068 hm2增加到2006年的1.657 hm2,而同期的人均生态承载力则由0.925 hm2下降到0.833 hm2,人均生态赤字由0.143 hm2增大为0.825 hm2,生态压力指数由0.858上升为1.126;万元GDP生态足迹在1.87～2.78 hm2之间上下波动,平均值为2.212 hm2.研究期内雅安市的人均生态足迹超出了人均生态承载力,表现出巨大的生态赤字,且生态赤字基本上呈直线上升趋势,雅安市的经济社会发展处于不可持续状态,土地生态系统始终处于超负荷和不安全的状态.这为揭示区域土地生态安全的本质提供一定参考,同时也指出协调人口、资源和区域经济发展可缓解这种不安全状态.     

夏季奶牛热应激的预防措施

奶牛要求最适宜的外界环境温度为 8～ 16℃ ,高于或低于这个临界温度 ,将会对奶牛产生一系列应激反应。在炎热的夏季 ,外界气温在 30℃以上的时间长达 3个月之久。在这种高温的环境下 ,奶牛表现呼吸加快 ,体温升高 ,散热量减少 ,食欲下降 ,产奶量降低 ,生理代谢紊乱 ,给生产带来很大损失。据研究 ,当气温从 2 5 9℃上升到 2 8 6℃时 ,奶牛标准奶产量下降 2 5 4%。因此 ,采取有效措施 ,消除夏季热应激对奶牛的影响 ,对保证奶牛高产、稳产具有重要经济意义。1　植树绿化夏天奶牛在运动场活动时间较长 ,搞好环境绿化 ,有助于改善牛场内部小…     

SARS-CoVS基因重组质粒的构建与瞬时表达

根据GenBank中登录的SARS-COV（BJ01株）基因序列设计引物，采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法从SARS病毒中扩增得到约3768bp的片段，将其克隆到真核表达质粒pVAX1，鉴定正确后．命名为pVAX1／S。体外转染Hela细胞．间接免疫荧光鉴定S蛋白的表达。构建的重组质粒经酶切及测序鉴定．开放阅读框正确；间接免疫荧光方法鉴定该重组质粒能在Hela细胞中表达。     

靶向PB2基因的特异性siRNA抑制禽流感病毒(AIV)复制

根据siRNA设计原则,设计并合成5对靶向禽流感病毒（AIV）PB2基因的siRNA（PB2374,PB2665．PB2936,PB21031和PB21233）,将其转染MDCK细胞,分别于转染前和转染后感染H5N1禽流感病毒A／Goose／Guang dongl／96株;在转染后24h、48h和72h分别收集上清液;通过血凝试验（HA）和Real-timePCR检测siRNA抑制A1V增殖的效果。血凝试验结果表明：所设计的5对siRNA中,PB2374抑制AIV增殖的效率为68％～71％,PB2963抑制AIV增殖效率为78％～81％;Real-timePCR检测到PB2374转染组PB2基因的转录水平与对照组比较降低3～3．3倍,PB2963转染组PB2基因的转录水平降低3．9～4．2倍。无论siRNA是先于还是迟于AIV感染,这两对siRNA都能明显地抑制AIV的增殖;本研究结果为开发抗AIV治疗制剂和动物机体抗AIV研究奠定了基础。