猪肺炎支原体膜蛋白的电泳分析及免疫印迹检测

以猪肺炎支原体Z株为试验材料,采用SDS-PAGE和Western印迹对该菌膜蛋白进行了分析。研究表明:猪肺炎支原体经A_(26)液体培养基培养,15000 r/min离心收集菌体细胞,低渗超声法破膜获得膜制剂后,应用12.5％的凝胶对膜蛋白进行SDS-PAGE分离,在电泳图谱上呈现出36条蛋白带,相对分子质量范围为1.18×10~4～9.12×10~4。同时以膜制剂作为抗原,分4次免疫试验兔,心脏采血,提取抗血清,并分离纯化得到IgG,然后进行Western印迹法检测。其结果发现在SDS-PAGE分离得到的36种膜蛋白(或多肽)中,有6种蛋白具有免疫原性。     

猪肺炎支原体黏附因子基因R1R2区的克隆及表达

根据GenBank登录的猪肺炎支原体232株P97基因和J株黏附因子基因设计了1对引物，以我国猪肺炎支原体Z株(强毒株)基因组DNA为模板，通过PCR方法扩增了该株黏附因子基因的部分序列。经序列分析后，重新设计了1对带有EcoRI和HindⅢ酶切位点的引物，并经引物的定点突变，PCR扩增了Z株黏附因子的R1R2区。扩增产物经双酶切后克隆到表达载体pET-32(a) 中。该重组质粒经酶切鉴定后，将其具有正确阅读框架的重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，37℃下经IPTG诱导表达，得到相对分子质量约29000的融合蛋白，表达量约为11％。     

禽胰多肽对肉鸡肝脏和小肠组织中APPR mRNA表达量影响的研究

本试验旨在研究禽胰多肽(APP)对肉鸡肝脏和小肠组织中APPR mRNA表达量的影响.试验以APP粗提液及层析APP制品为材料,选取90只1周龄艾维菌肉鸡随机分为5组,每组3个重复,每个重复6只鸡.Ⅰ设为对照组,Ⅱ、Ⅲ设为饲饮组,Ⅳ、Ⅴ设为注射组.在第7周末,屠宰取其肝脏、小肠组织,运用SYBR Geen Ⅰ实时荧光定量PCR(RT-PCR)法对肝脏和小肠中APPR mRNA的表达进行相对定量分析.结果发现:注射组与饲饮组肝脏及小肠中APPR mRNA的表达水平与对照组相比均呈下降趋势,且注射组降低程度大于饲饮组降低程度;其中,注射组与饲饮组中均是层析APP制品比APP粗提液的下降较明显.提示在外加APP情况下可对APPR mRNA的表达呈现抑制作用.本研究结果为进一步探讨APP与其受体之间的关系,从而为阐明其生理功能和作用机制提供一定的理论依据.     

堆型艾美耳球虫早熟株免疫雏鸡后血清抗体水平动态变化的研究

用堆型艾美耳球虫早熟株对雏鸡进行一次免疫和二次免疫试验 ,研究雏鸡血清抗体的动态变化。试验结果显示 ,在一次免疫试验中 ,各剂量组雏鸡均在免疫后 2天血清抗体出现较高的 OD值 ,之后呈下降趋势 ,11天后逐渐上升 ,到 12～ 13天时出现第 2个峰值 ,各组间的血清抗体 OD值比较 ,3 0 0 0个卵囊 /只剂量组极显著 (P<0 .0 1)高于 10 0 0个 /只、2 0 0 0个 /只和 5 0 0 0个 /只剂量组。在二次免疫试验中 ,8日龄首免、14日龄二免组雏鸡的抗体水平动态变化整体呈上升趋势 ,峰值 (0 .3 75 )出现在二免后第 10天 ,其后稳定地维持在较高水平 (平均 OD值为 0 .3 5 ) ,并且其抗体水平显著地高于 6日龄首免、12日龄二免组 (P<0 .0 5 )。抗体水平动态变化表明 ,堆型艾美耳球虫早熟株有较强的免疫保护力 ,其免疫方式可选用一次免疫 ,剂量为 3 0 0 0个卵囊 /只 ,也可采用二次免疫 ,即 8日龄首免 (15 0 0个 /只 ) ,14日龄二免 (15 0 0个 /只 ) ,从抗体动态变化的稳定性看 ,二次免疫更佳     

发菜形态特征及其与环境因子的关系

通过野外调查和室内观察分析 ,天然发菜原植体的形态主要有柱状和带状两种 ;群体形态有单丝体、团块状、辫状、束状和网状。原植体的形态特征受环境湿度的影响较大 ,在降水量较大的地区 ,发菜原植体增粗 ,直径在 0 .0 5～ 0 .2 5 mm之间 ,带状发菜的比例较大 ,占 30～ 60 % ,吸水后藻体的颜色一般呈棕褐色 ;在降水量较小或极端干旱地区 ,发菜以细丝状为主 ,直径在 0 .0 2～ 0 .2 2 mm之间 ,带状发菜的比例不足 2 5 % ,吸水后藻体的颜色呈绿色或浅棕褐色。发菜群体形态的形成和发育与自身的生长特性有关外 ,主要与环境因子特别是降雨量、地形及自然外力 (地面径流和空气流动 )有关。     

不同覆土深度对鸡腿菇子实体产量的影响

本试验研究 11种覆土深度对鸡腿菇子实体产量影响。结果表明 ,不同覆土深度对子实体产量、有效子实体数和幼蕾数均存在显著的影响。覆土越厚 ,幼蕾数越少。当覆土深度在 0 5～ 3cm时 ,子实体产量和有效子实体数随着覆土层的加厚逐渐增加 ,在覆土深度为 3cm时达到最大值 ,覆土深度大于 3cm时 ,则随着覆土层的加厚而逐渐减少。从生产的角度看 ,覆土 3cm是比较适宜的覆土深度 ,此时的子实体产量最高。     

Osmolarity,cell volume and proliferation in nasopharyngeal carcinoma cells

AIM: To investigate the relationship between osmolarity, cell volume and cell proliferation in nasopharyngeal carcinoma cells. METHODS: MTT method was applied to detect the proliferation ability of the poorly-differentiated nasopharyngeal carcinoma cell (CNE-2Z) under various osmolarity conditions. The flow cytometry was used to analyse cell cycle distribution. Cell volume was obtained by the image analysis of living cells and cell viability was determined by the trypan blue assay. RESULTS: Cultivation of cells under the hypertonic conditions of 370 and 440 mOsmol/L increased cell volume by 8.7% and 27.8% and facilitated cell proliferation by 22.2% and 33.9%, respectively. However, hypotonic incubation of cells with osmolarity of 160 and 230 mOsmol/L decreased cell volume by 12.8% and 4.1% and inhibited cell proliferation by 34.0% and 15.6%, respectively. Cell volume was positively correlated with cell proliferation rate. Long-term cultivation of cells under anisotonic conditions did not significantly alter cell cycle distribution, but hypotonic cultivation decreased cell viability. CONCLUSION: Proliferation of nasopharyngeal carcinoma cells was closely correlated with the osmolarity of culture medium and cell volume. Hypotonic cultivation may inhibit cell proliferation by decreasing cell volume to facilitate cell death mechanisms.     

Influence of Sini decoction on the proliferation and apoptosis of artery smooth muscle cells after balloon injury

AIM: To investigate the influence of Sini decoction (SND) on the proliferation and apoptosis of rabbit abdominal aorta smooth muscle cells after ballon injury and discuss the effect of vascular smooth muscle cell's (VSMCs) proliferation and apoptosis in post-percutaneous coronary intervention (PCI) restenosis (RS) and the feasibility of SND preventing post-PCI RS. METHODS: The animal model of rabbit abdominal aorta ballon injury was set up and the therapertic group was treated with SND. The shape of proliferative and apoptotic cell were investigated by electron microscope. Immunohistochemistry staining was performed using α-actin,PCNA and Cyclin E monoclonal antibodies. In situ Cell Death Detection Kit was used to identify apoptotic cells. Abdomial aorta angiography was operated in the 84th day subgroup and the stenosis degree was evalued by quantitative angiographic analysis. RESULTS: As compared with the control group, the therapeutic group displayed a lower proliferative percentage and a higher apoptosic percentage (P<0.05). Moreover, the apoptosic peek time was on the 14th day after operation,which was longer than the control group. CONCLUSION: SND effectly inhibited the proliferation of VSMCs and iuduced apoptosis in VSMCs.     

乙烯对匍匐翦股颖ISR抗病反应中AsA-GSH循环及胼胝质沉积的影响

以匍匐翦股颖品种“Penn-A4”为试验材料,侵染立枯丝核菌后,经丁二醇(BDO)诱导产生系统抗性(ISR),喷施不同浓度的乙烯合成抑制剂氯化钴(CoCl₂)和促进剂1-氨基环丙烷羧酸(ACC)后,检测抗坏血酸-谷胱甘肽(AsA-GSH)循环中抗坏血酸(AsA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量及相关酶活性的变化,并观察匍匐翦股颖ISR反应中胼胝质沉积的变化。结果表明,乙烯抑制剂处理下,匍匐翦股颖幼苗中AsA含量较低,抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性下降,大量GSH被催化还原为氧化型谷胱甘肽(GSSG),GSSG大量积累,同时谷胱甘肽还原酶(GR)活性较低,GSSG经GR少量还原为GSH。乙烯促进剂处理下,AsA含量较高,APX活性升高,GSSG在高活性GR作用下催化还原为GSH,使得GSH大量积累。因此在匍匐翦股颖ISR抗病反应中,高浓度乙烯促进AsA和GSH的大量积累,它们不仅参与了活性氧的代谢平衡,同时也作为信号分子在ISR抗病反应中起着重要作用。匍匐翦股颖感染褐斑病后,胼胝质主要沉积在厚壁细胞、韧皮部、木质部和表皮组织,其中厚壁细胞胼胝质沉积最多,表皮组织沉积最少。此外,胼胝质沉积面积在不同乙烯信号分子处理间存在差异,但随着处理时间的延长差异不显著。一定浓度的乙烯对ISR反应中胼胝质的沉积具有一定的影响,随着处理时间的延长显著增加,在100 μmol·L^-1ACC处理5 d后,胼胝质沉积总面积仅为9.916 mm²,处理10 d后升至最高,为38.396 mm²,但在病害侵染后期,胼胝质数量减少,在100 μmol·L^-1ACC处理15 d后,胼胝质沉积总面积降至20.052 mm²,反映了乙烯信号分子对胼胝质沉积的影响是一种短期效应,短期内可提高匍匐翦股颖植株抗病性,具有信号分子的短时效特点。研究结果为探清匍匐翦股颖ISR抗病响应中ET信号分子如何调控抗病生理特性提供了理论基础。     

四倍体鸭茅产量及其构成因素的QTL定位

产量相关性状是复杂的数量性状,对鸭茅的单株产量及构成因素进行QTL分析,可提高育种中对产量性状优良基因选择的效率,同时为鸭茅遗传改良、基因克隆及分子标记辅助育种提供理论依据。以四倍体鸭茅“楷模”和“01436”为亲本杂交而成的作图群体为试验材料,于2014年对洪雅、宝兴两个不同生境下鸭茅株高、旗叶长、倒二叶长、旗叶宽、倒二叶宽、茎粗、花序长、分蘖数、单株干重等9个产量相关性状进行了表型鉴定及相关性分析。此外,在已构建的高密度鸭茅分子遗传图谱的基础上,采用MapQTL 5.0进一步对这些性状QTL定位分析。结果表明,绝大多数性状在亲本间呈显著差异且都整体表现出连续变异,符合数量性状遗传的特征;相关性分析表明,大多数产量相关性状均与干重极显著正相关,与单株干重相关性最好的依次为分蘖、株高;QTL分析发现,控制该9个农艺性状的QTL共60个,洪雅38个,宝兴22个,这些QTL分别定位于分子连锁图谱的1、2、3、4、5共5个连锁群上,单个QTL的贡献率为5.7%~24.7%,单个性状QTL个数为2~15个。其中,控制株高、花序长的QTL各12个,控制倒二叶长、茎粗的QTL各4个,控制旗叶宽、倒二叶宽的QTL各2个,控制单株干重的QTL有6个,影响分蘖的QTL为3个,与旗叶长相关的QTL最多15个。