大豆DDRT分析中单引物造成假阳性的研究

[目的]探讨mRNA差异显示技术（DDRT）出现假阳性的原因。[方法]以大豆品种＂吉林30＂和＂通农13＂为材料,对DDRT分析中造成的假阳性进行了分析。[结果]DDRT假阳性的一个重要来源是由于单引物与cDNA组结合导致非特异性扩增造成的。在DDRT试验中,应平行设置单一引物的PCR试验以校正所得差异片段是否为假阳性或混杂有单引物PCR产物。[结论]为提高DDRT试验成功率奠定了基础。     

抑制大豆Le1基因表达的RNAi载体构建

本研究采用RT-PCR克隆大豆子粒Le1基因核心保守序列515bp片段,以植物表达载体pCAMBIA1301为基本载体,构建了抑制大豆Le1基因表达的RNAi载体。通过酶切检测及测序,证明表达载体构建正确。本研究为通过RNAi技术降低大豆中凝集素含量,改良大豆品质奠定了基础。     

大豆DDRT分析中单引物造成假阳性的研究（摘要）

[目的]探讨mRNA差异显示技术（DDRT）出现假阳性的原因。[方法]以大豆品种＂吉林30＂和＂通农13＂为材料,对DDR分析中造成的假阳性进行了分析。[结果]DDRT假阳性的一个重要来源是由于单引物与cDNA组结合导致非特异性扩增造成的。在DDT试验中,应平行设置单一引物的PCR试验以校正所得差异片段是否为假阳性或混杂有单引物PCR产物。[结论]为提高DDRT实验成功率奠定了基础。     

植物RNA干扰表达载体构建方法的研究

从传统酶切—连接、同源重组、PCR技术为基础结合酶切—连接等方法,对近年来植物RNA干扰表达载体的最新构建方法进行综述。     

应用RNA干扰技术创造低脂肪氧化酶活性大豆新种质

 【目的】通过RNA干扰技术抑制大豆籽粒中脂肪氧化酶基因表达,改良大豆品质,创造优良大豆新种质,探索大豆品质育种新途径。【方法】采用RT-PCR技术克隆大豆籽粒脂肪氧化酶基因（Lx1、Lx2、Lx3）核心保守序列357 bp片段,通过重组PCR构建大豆脂肪氧化酶基因RNA干扰表达载体,利用花粉管通道法转化大豆品种吉农18。【结果】获得了12个转基因株系,其中10个株系发生明显变化,SDS-PAGE电泳和脂肪氧化酶活性测定表明转基因植株籽粒中脂肪氧化酶活性明显降低,平均减低64.2%;经近红外谷物分析仪测定,转基因植株脂肪含量平均提高0.8%～1.5%,总蛋白含量降低1.2%～3.0%;RT-PCR结果表明转基因株系中脂肪氧化酶mRNA积累受到明显抑制。转基因植株2代及3代检测结果表明,转基因植株脂肪氧化酶活性均明显降低,脂肪含量均有所提高。【结论】应用RNA干扰技术可有效的抑制大豆籽粒中脂肪氧化酶基因表达,降低脂肪氧化酶活性,提高大豆油份含量,改良大豆品质,创造优良大豆种质。     

水稻新品种“农粘2号”选育及栽培技术

水稻新品种"农粘2号"是以"恢粘一"为母本、"藤系150"为父本,经人工有性杂交和系谱法选育而成。2009—2010年区域试验结果:平均产量8 093.2 kg/hm2,比对照"通粘一"增产6.6%;生产试验结果:平均产量8 597.7 kg/hm2,比对照"通粘一"增产7.8%。该品种于2011年通过吉林省农作物品种审定委员会审定,适宜吉林省的吉林、长春、松原、四平、通化等中晚熟稻区种植。     

应用重组PCR技术构建植物基因RNA干扰的结构

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来生物学领域研究的热点之一,本研究应用改进的重组PCR技术构建大豆脂肪氧化酶基因及玉米淀粉分支酶基因的RNA干扰构件,以探索一条简便快捷,适应范围广范的植物基因RNAi结构构建方法.