人蛋白激酶CK2 3个亚基cDNA的克隆与测序

目的构建人蛋白激酶CK2 α、α′和β亚基cDNA重组表达质粒深入进行CK2结构与功能的研究.方法利用RT-PCR、定向克隆和DNA测序等进行本实验.结果通过反转录PCR从HL-60细胞中获得了人蛋白激酶CK2 α、α′和β亚基编码区cDNA,将Nde I /HindⅢ双酶切的3种PCR产物分别与同样双酶切的表达载体pT7-7进行定向连接.CaCl2法分别转化DH5 α获转化子,快速提取质粒DNA进行电泳初筛得到阳性克隆.限制性酶切分析结果表明插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符.每种CK2亚基都各随机挑选4个阳性克隆,PEG法进行纯化.采用PE ABI的Big Dye荧光标记的终止底物循环测序试剂盒,使用各种引物进行正反向DNA测序.通过测序分别在每种CK2 α、α′和β亚基的4个阳性克隆中筛选到2个、1个和2个含完全正确的人CK2 α、α′和β亚基cDAN的重组质粒克隆,其余的克隆均存在1～2个碱基突变.我们将这种含正确序列的重组质粒分别命名为pTCKA、pTCKA′和pTCKB.结论CK2全套3个亚基重组质粒克隆的成功,将为在原核细胞中表达人CK2 α、α′和β亚基以及利用人CK2 α、α′和β cDNA作为探针进行深入研究打下基础.     

槲皮素对重组人蛋白激酶CK2的抑制作用

槲皮素（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ,Ｑｕｅ）是一种天然黄酮类化合物,具有多种药理作用,如抑制癌细胞的ＤＮＡ的合成,抑制多种信号传递中蛋白激酶Ｃ的活性及某些受体的酪氨酸蛋白激酶的活性。但这些作用之间是否存在某些联系及这些药理作用的机制仍不太清楚。蛋白激酶ＣＫ２...     

重组人蛋白激酶CK2α和β亚基的原核表达、纯化及鉴定

蛋白激酶CK2是一种信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,是由两个催化亚基(α或α′)和两个调节亚基(β)组成的四聚体.目前该酶有近200种蛋白底物,底物涉及到细胞功能的许多方面,但其确切功能仍不清楚.由于该酶在细胞中的含量较少,提取纯化得到研究所需的量较困难.因此克隆并表达重组蛋白激酶CK 2对于深入研究该酶具有十分重要的意义.     

人蛋白激酶CK2 β亚基cDNA重组质粒的构建与测序

蛋白激酶ＣＫ２,曾称为酪蛋白激酶Ⅱ或２,是真核细胞中普遍存在的一种ｃＡＭＰ非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶。它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体。在进化过程中该酶的氨基酸和核苷酸序列保持高度保守性,属于一种看家酶。在代谢过程...     

人蛋白激酶CK2 α亚基cDNA重组质粒的构建与测序

蛋白激酶ＣＫ２是真核细胞中普遍存在的一种ｃＡＭＰ非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶。它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体。ＣＫ２α基因具有癌基因作用。ＣＫ２可能是重要的药理靶点，其特异性抑制剂具有潜在的临床治疗价值。目前该酶的...