一种高效的莱茵衣藻电转化方法

【目的】为了探明莱茵衣藻Chlamydomonas reinhardtii最佳的转化条件。【方法】将融合基因4CL-3aSTS与绿色荧光蛋白(GFP)分别作为目的基因,以aphVIII为抗性基因,采用电转化法将两种目的基因分别转入野生型(WT)莱茵衣藻和细胞壁缺失型莱茵衣藻(CC425)中。【结果】用巴龙霉素抗性筛选以及通过PCR验证与荧光共聚焦显微镜检测,证实目的基因在两种莱茵衣藻中成功表达。【结论】获得了一种高效的莱茵衣藻电转化方法,野生型衣藻转化率为11.07%,细胞壁缺失型衣藻转化率为49.67%。     

转基因莱茵衣藻中白藜芦醇的提取工艺

【目的】为了探明一种从单细胞藻类植物中提取和纯化白藜芦醇的有效方法。【方法】以能合成白藜芦的转基因莱茵衣藻为材料,使用酶解与萃取的方法提取白藜芦醇,利用高效液相色谱法检测白藜芦醇浓度。【结果】以肉桂酸为底物诱导转基因衣藻积累白藜芦醇,进行9h酶解后超声萃取30min,接着用60%的甲醇溶液在60℃条件下提取6h。【结论】此方法提取莱茵衣藻中的白藜芦醇效率相对较高,为利用藻类植物生产白藜芦醇奠定了基础。     

森林草莓‘Hawaii4’继代培养与遗传转化条件的优化

【目的】探明森林草莓高效的组织培养和基因工程转化方法。【方法】以森林草莓组培苗为试验材料,对继代培养条件包括基本培养基、培养基的pH值、含糖量、琼脂量等以及遗传转化条件包括植物激素的选择、农杆菌的浓度等进行了摸索。【结果】组培苗继代培养的最佳条件为:1/2 MS,10g/L糖,7g/L琼脂粉,pH5.8。遗传转化的最佳条件为:叶片叶龄:39d左右,菌液浓度OD600=0.6,侵染时长15min,植物激素种类与配比:3.0mg/L的6-BA和0.2mg/L的IBA,暗培养2d,草铵膦筛选质量浓度:2mg/L。【结论】获得了有利于森林草莓愈伤组织生芽和幼苗生长的优化培养基成分,以及高效率的基因转化条件。