基于Spyligase技术的禽流感血凝素H5HA10多聚体抗原的高效制备

利用Spyligase技术在H5HA10序列的C端和N端分别加上SpyTag和KTag序列,并分别与His6-ArsC、His6-PAS200、His6-XTEN、His6-PEAT、SiTag3-SUMO、SiTag3-MBP、SiTag3-PAS200、SiTag3-XTEN和SiTag3-ArsC促溶标签相连,成功构建了含9种不同促溶性标签的H5HA10重组表达载体,同时构建了1种含有Cherry标签的Spyligase重组表达载体。将这10种重组载体分别转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,筛选出可以显著促进H5HA10重组蛋白表达的融合标签ArsC。通过优化诱导表达条件,在大量诱导表达、纯化后成功获得了高纯度的H5HA10和Spyligase重组蛋白,最终在PCT缓冲体系中, Spyligase促使H5HA10重组蛋白的蛋白聚合,形成了环化单体、三聚体、六聚体以及九聚体。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5/M蛋白可溶性表达及免疫原性分析

为表达出高可溶性的GP5/M蛋白并检测其免疫原性,本试验将高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)HN07-1毒株ORF5和ORF6基因序列上GP5和M蛋白的编码核苷酸序列进行密码子偏爱性优化设计,构建了GP5/M融合Grifin、GST、MBP、NusA、Sumo、Thioredoxin、γ-crystallin、ArsC、PpiB、CeHSP17共10种不同可溶性标签的表达重组载体。分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导,SDS-PAGE电泳对融合蛋白的可溶性表达进行检测,筛选出高可溶性表达的GP5/M融合蛋白。重组蛋白通过Ni-NTA Agarose亲和纯化,免疫家兔,对获得的兔抗GP5/M血清进行间接ELISA和病毒中和试验。结果显示,成功构建10个GP5/M表达载体,10个标签中,MBP与GP5/M蛋白相融合的可溶性表达效果最好,并获得了高纯度的MBP-GP5/M重组蛋白质;通过免疫家兔,检测重组蛋白具有免疫原性并能刺激机体产生较高水平的中和抗体。结果表明,试验成功建立了稳定获得GP5/M重组蛋白质的方法,初步鉴定了重组蛋白的免疫效力,为PRRSV亚单位疫苗的后续研究及大量制备奠定基础。     

O型口蹄疫病毒衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及电镜检测

本试验旨在表达出高可溶性的O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白,并通过电镜检测,以期望形成纳米样颗粒。根据O型FMDV核酸序列,得到FMDV O/GER/Wup/82株的衣壳蛋白基因,并进行截短和优化,共133个氨基酸;同时,从肠道沙门菌(Salmonellaenterica)中分离得到135个氨基酸铁蛋白(Ferritin)基因片段,将O型FMDV衣壳蛋白与铁蛋白串联,设计并合成了FMDV衣壳蛋白-铁蛋白基因片段,命名为SeFnt16599。构建了SeFnt16599融合Grifin、GST、MBP、Sumo、Thioredoxin、γ-crystallin、ArsC、PpiB、CeHSP17等9种不同可溶性标签的表达重组载体。分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导,SDS-PAGE电泳对融合蛋白的可溶性表达进行检测,筛选出高可溶性表达的SeFnt16599融合蛋白。重组蛋白通过Ni-NTA Agarose亲和纯化,进行电镜检测。结果表明,成功构建9种SeFnt16599表达载体;9个标签中,MBP与SeFnt16599蛋白相融合的可溶性表达效果最好,并获得了高纯度的MBP-SeFnt16599重组蛋白质;电镜结果显示,MBP-SeFnt16599形成了纳米样颗粒。本试验建立了稳定获得SeFnt16599重组蛋白质的试验方法,为FMDV衣壳蛋白新型结构疫苗的开发及后续研究奠定了基础。     

校企共建“资源工厂”模式探索与实践——以洛阳职业技术学院宠物诊疗专业为例

在职业教育“教随产出、产教同行”的时代背景下，校企融合共建“资源工厂”凸显其重要意义。“资源工厂”是校企培养高技能型人才、进一步实现产教融合的重要载体。以洛阳职业技术学院宠物诊疗技术专业为例，进行校企融合、共建“资源工厂”、创新教学资源建设模式探索，形成“三共建、一打造”实践路径，以期为高职院校宠物诊疗技术专业培养高水平技能型人才提供新路径。