致鸡产蛋下降禽病原的检测基因诊断芯片的研制及临床应用

本试验研究的目的是利用RT-PCR技术扩增出新城疫病毒(NDV)、低致病性禽流感病毒(AIV H9)、传染性支气管炎病毒(IBV)、减蛋综合征(EDS)、传染性喉气管炎病毒(ILT)、鸡毒支原体(MG)各一段保守序列,以纤维素酯膜作为生物芯片制作的基质,通过微量点样技术制作基因芯片(gene chip)。从可疑病料中提取组织核酸,通过掺入法bio-11-dUTP标记,对杂交信号的强弱检测来实现对生物样品的高效分析诊断。     

六种禽病原检测的基因诊断芯片的研制及临床应用

利用RT-PCR或PCR技术扩增出新城疫病毒（newcastle disease virus）、低致病性禽流感病毒（avian influenza）、传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus）、减蛋综合征（egg drop syndrome）、传染性喉气管炎病毒（infectious laryngotracheitis）、鸡毒支原体（mycoplasma gallisepticum）基因的各一段保守序列,以纤维素膜作为生物芯片制作的基质,通过微量点样技术产生二维DNA探针阵列,即基因芯片（gene chip）。从可疑病料中提取病原核酸,通过RT-PCR掺入法标记bio-11-dUTP,将获得的标记PCR产物和基因芯片进行杂交,通过检测杂交信号的强弱来实现对生物样品的快速、高效检测及分析。芯片灵敏度高于RT-PCR和病毒分离,分别为RT-PCR和病毒分离的102倍和104倍,有忠实的特异性,动物实验结果符合率在95%以上。     

鸡14种病毒病基因芯片的研究

应用PCR或RT—PCR方法分别获得鸡新城疫(ND)、禽流感(AI)、鸡传染性支气管炎(IB)、鸡传染性法氏囊病(IBD)、鸡传染性喉气管炎(ILT)、鸡马立克氏病(MD)、减蛋综合征(EDS-76)、禽网状内皮组织增生症(RE)、鸡脑脊髓炎(AE)、鸡传染性贫血症(CIA)、鸡病毒性关节炎(AVA)、包涵体肝炎(IBH)、禽白血病(AL)、鸡痘(FP)各一特异性片断，以这些片断为探针，采用接触式点样技术，制成低密度的DNA阵列芯片。自病料中提取核酸，通过生物标记技术，使样品核酸标记上生物素。当样品和预点在硝酸纤维素膜上的探针杂交后．通过显色技术，即可得出诊断结果。     

实时荧光PCR方法检测禽病毒病的研究

通用探针是实时荧光PCR探针类的一种,具有高度的特异性和灵敏度,可对样品进行准确的定量分析。本试验主要采用该方法对通用探针检测禽病毒病进行了研究,试验结果显示本方法的特异性、灵敏度和Taq Man探针相近,且具有操作简便、费用低廉等优点。     

实时荧光PCR方法检测禽病毒病的研究

通用探针是实时荧光PCR探针类的一种,具有高度的特异性和灵敏度,可对样品进行准确的定量分析。本试验主要采用该方法对通用探针检测禽病毒病进行了研究,试验结果显示本方法的特异性、灵敏度和Taq Man探针相近,且具有操作简便、费用低廉等优点。