猪脑中硫氧还蛋白还原酶的纯化与表征

[目的]用新的方法从猪脑中提取纯化硫氧还蛋白还原酶(TrxR)并对其进行表征。[方法]通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow弱阴离子交换凝胶色谱柱层析、Blue-Sepharose亲和色谱柱层析、Resource Q强阴离子交换色谱柱层析和Superdex 200 prep grade凝胶过滤色谱柱层析等方法,从猪脑中分离并纯化TrxR。采用聚丙烯酰胺电泳法、等电聚焦法、DTNB还原法和胰岛素还原法对TrxR的性质进行表征。[结果]从猪脑中分离并纯化出TrxR,其纯度大于99%,是酶粗提液的6 000倍,最终产率为13.9%。猪脑TrxR的分子量为56.0 kD,等电点为5.0。以DTNB为底物测得其K m和k cat值分别为62.9μmol/L和467 min-1,以硫氧还蛋白为底物测得其K m和k cat值分别为3.9μmol/L和2 813 min-1。[结论]用新的方法从猪脑中纯化得到较高纯度的TrxR,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。