甘蔗黄叶病毒与花叶病毒CP基因RNAi载体构建与转化甘蔗研究

甘蔗黄叶病和甘蔗花叶病是我国甘蔗最主要的病毒病,感病品种产量下降和品质变劣,传统方法难以防治。RNA干扰技术使培育抗病毒甘蔗品种成为可能。本研究根据甘蔗黄叶病毒和侵染甘蔗的高粱花叶病毒结构与功能特性,广泛收集不同来源病毒分离物CP基因序列,经过比对选取保守序列作为干扰序列。通过在序列两端添加酶切位点,合成并连接成双价甘蔗黄叶病和花叶病毒干扰序列,然后构建到中间载体p HANNIBAL上,形成双价RNAi干扰结构,最后插入到p ART27上形成干扰表达载体。利用基因枪轰击甘蔗品种福农15号愈伤组织进行转化,经G418筛选获得抗性再生植株。通过提取DNA和RNA分析,证实双价RNAi干扰结构不仅以不同拷贝整合到甘蔗基因组中,而且得到了转录表达。     

植物磷匮乏下的根系、代谢和分子响应研究进展

磷是植物正常生长发育所必需的大量元素之一.由于多数土壤条件下可获得的有效磷不足,因此土壤中的磷会影响作物产量潜力的表现.了解植物对低磷胁迫或磷匮乏的响应机制是至关重要的,相关研究已经取得一系列的进展.本文回顾了植物磷匮乏条件下根系统的响应,因为外部土壤中磷的供应状态会影响根构型,评述了植物激素和磷酸酶对磷匮乏的响应,并...     

甘蔗基因表达定量PCR分析中内参基因的选择

以甘蔗接种黑穗病菌后0、6、12、24、48、60和72 h时间点的材料为研究对象,应用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR Real-time qPCR)技术,探讨25S rRNA、GAPDH、β-actin和β-tubulin4个内参基因mRNA水平的表达情况.经geNorm程序统计学分析,4种内参基因的表达稳定性各异,25S rRNA>GAPDH>β-actin>-tubulin,其中以25S rRNA表达稳定性最好,且根据该基因设计的两对定量PCR引物都是可行的.同时,甘蔗PPO基因表达特性的定量PCR分析也显示,甘蔗PPO基因与植物的抗病性相关.结果显示,研究中所筛选的内参基因是合适的.     

几个籼稻品种的成熟胚愈伤组织植株再生体系的建立

组织培养技术在作物改良上的成功应用需要合适的植株再生体系。本试验以7个籼稻成熟胚为材料，通过优化激素配比，建立适合于水稻遗传转化的高频植株再生体系。研究结果表明，NB 2mg／L2，4-D适合于供试品种的成熟胚愈伤组织的诱导，诱导率达90％以上；在分化培养基中添加3．0-3．5mg／L KT，0．5～1．0mg／L NAA和5．0mg／L ABA的激素配比，明恢81、N175、航1号的最高分化率分别达72．7％、80．0％和78．0％；移栽成活95％以上。     

运用信息资源培养小教本科生的科研能力

随着我国基础教育改革的不断深入,现有高师小教本科生的科研能力培养,远远不能适应基础教育改革与发展对小学教师专业化发展的培养要求。课题研究从信息资源与科研能力的内在联系入手,结合本校小教专业5个班级本科生的科研能力现状调查,重点阐述了学科馆员与专业教师相结合运用信息资源培养小教本科生科研能力的体会。     

甘蔗转基因改良及转基因检测机构的角色

我国甘蔗转基因研究取得了长足进展，现对我国甘蔗转基因研究实践中使用的改良方法进行回顾总结，并结合国际甘蔗转基因研究的现状指出未来甘蔗转基因研究的发展方向。针对转基因研究的高度社会敏感性，阐述法定转基因检测机构对保护和促进我国甘蔗转基因研究健康发展将起到的重要作用。     

利用改进的Oligo-Capping法构建甘蔗茎全长cDNA文库

Oligo-Capping法是目前全长cDNA文库构建的重要方法之一.笔者在引进、消化和吸收的基础上,通过对特异引物和接头序列的设计,及cDNA扩增反应条件的优化,对该方法进行了一些切实可行的改进,形成了一套简便易行的技术体系.利用本研究中改进的Oligo-Capping法,成功地构建了甘蔗茎全长cDNA文库.综合评价结果表明,本研究中所构建的甘蔗茎全长cDNA文库的库容大于2.5x106cfu,重组率为91%,全长率高达88.9%.本文库的构建为进一步甘蔗茎中全长基因的克隆和功能基因的表达分析奠定了基础.     

甘蔗抗黑穗病育种技术的研究──Ⅰ．品种抗病性鉴定技术的研究

（１）采用针刺接种、催芽接种和浸渍接种等３种接种方式对１３个甘蔗品种进行抗黑穗病能力的评价，结果表明：品种间对黑穗病的抗性存在着真实的遗传差异；浸渍接种可使品种的形态学抗性和生理生化抗性得到充分体现，客观而真实地反映品种的抗病性；针刺接种或催芽接种可越过形态学障碍而直接检查品种生理生化的抗性反应。（２）采用浸渍接种法测定８个甘蔗品种在整个发病生长季产生黑穗病株的发展动态，从累积的丛感染率和感染率的发展曲线分析表明：黑穗病鞭子在整个生长季的发生，明显有３个稳定的发展水平，丛感染率虽能较好地反映品种的初侵染，而茎感染率则更适于检测再侵染的状况，更加准确地评价品种的抗病性；茎感染率的发展曲线采用模拟是适宜的，其中Ｋ值作为品种抗病性鉴定指标以评价甘蔗品种抗黑穗病的育种潜力是可行的；采用病情流行总量作为品种抗病性鉴定指标比其他流行学参数（如Ｙｍａｘ．Ｙｏ．Ｐ．ｒ）可能会更合理些，与Ｋ值的评价效果取得了一致性。