新孢子虫NcGRA7与NcGRA2串联基因的真核载体构建与体外瞬时表达

本研究为构建新孢子虫NcGRA7与NcGRA2串联基因的真核表达载体,以SOE-PCR技术得到新孢子虫NcGRA7-NcGRA2串联基因,并先克隆到pMD-19T载体上,经测序未发现移码后,再克隆到pDNA3.1载体上,用IFA进行体外瞬时表达的鉴定。结果表明,pDNA3.1-NcGRA7-NcGRA2串联基因的真核表达载体构建成功,在体外真核细胞内能表达外源蛋白。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒延边地方株GP4结构基因分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)易引起基因变异现象,使得异地疫苗不能有效控制本地区猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的发生.为研制适合本地区的亚单位疫苗,参照GenBank中已发表的PRRSV序列设计了1对特异性引物,对吉林省延边地区分离株YB-0605 GP4基因进行了序列扩增和测序,序列分析结果表明,PRRSV YB-0605株GP4氨基酸序列与CH-1α、HEB1株氨基酸序列高度一致,而与VR-2332、BJ-4株有一定差异,和LV株在N端及中心区具有很大差异,YB-0605株GP4蛋白抗原性及亲水性与河北省株具有较高相似性;与VR-2332株相比,GP4蛋白在第30 ～40位氨基酸处抗原表位形态发生较大变化,在第50位氨基酸处抗原表位优势增强现象.     

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒延边地区地方株的分离鉴定

为弄清猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)发病机理及研制PRRSV本地弱毒疫苗和基因工程疫苗,预防和控制PRRS的发生,进行了PRRSV病毒本地株分离试验.采用细胞分离培养、理化特性与血液凝集试验等方法,成功分离了1株PRRSV,命名为YB-0605株.PRRSV的结构蛋白GP4、GP5和M都能刺激机体产生免疫应答,在机体的抗病毒免疫中发挥不同的作用.研究结果为PRRS流行病学丰富了数据库,同时为研究PRRSV变异规律提供了有益的参考数据.     

延边黄牛GHR基因第9外显子多态性分析

生长激素受体(GHR)是一种跨膜糖蛋白,是细胞因子/造血因子受体超家族的成员之一,大约由620个氨基酸组成,不同物种氨基酸的数目有所不同。多数动物的GHR分子质量在100～130 ku之间。起初人们认为富含GHR的组织是肝脏,随着辐     

吉林南部地区规模化猪场猪病流行动向及常见疫病的诊治

近年来随着养猪业不断向规模化、集约化发展,同时也由于畜禽及其产品的频繁流通和交易,猪的疫病仍比较严重,由于疫病的存在,直接影响了猪场的生产效益和经济效益,甚至造成养猪场的严重亏损和倒闭。近几年我国猪病的种类越来越多,疾病的复杂程度不断加剧,对疾病的控制也越来越难。据调查估测,猪传染病占总发病率72％以上,死亡率约为8％～12％。本文就2005～2007年吉林南部地区猪病发生情况及对策进行了调查,并对猪传染病发生的原因及防制措施提供了一些可行性建议。     

黄曲霉毒素解毒酶在小鼠肠道中的特异性表达

通过筛选出黄曲霉素解毒酶(ADTZ)基因片段,采用鼠的黏蛋白启动子(MUC)成功构建了ADTZ基因肠道特异性表达载体(MUC-ADTZ-LV),并利用原核注射法制备了肠道特异性表达ADTZ转基因小鼠。PCR和Southern blot鉴定结果显示,成功制备了6只携带肠道特异性表达ADTZ基因转基因小鼠。RT-PCR结果显示,ADTZ基因仅在小鼠肠道中进行了特异性表达。肠液中ADTZ的活性为(4.62±1.54)U/mL。在饲料中添加黄曲霉毒素并对小鼠进行14d的喂养试验,之后对血清生化指标及小鼠血清和肝脏中黄曲霉毒素的残留进行了测定。结果表明,转基因组血清中总蛋白(TP)和球蛋白(GLP)的含量显著高于阳性对照组,而转基因组血清中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量显著低于阳性对照组(P0.05)。转基因组小鼠血清和肝脏中黄曲霉毒素的残留量显著低于阳性对照组小鼠血清和肝脏中黄曲霉毒素的残留量。本试验在转基因小鼠的肠道中成功生产了ADTZ,并降低了饲料中黄曲霉毒素对小鼠毒性的影响。     

抑制素免疫对繁殖调控的影响

抑制素是由动物性腺分泌的异二聚体蛋白激素，它通过选择性抑制垂体促性腺激素（主要是FSH）的分泌，进而影响动物的生殖活动。而利用抑制素对动物主动或被动免疫，可增加排卵率，提高繁殖力的独特功能越来越受到人们的重视。本文就近年来有关抑制素免疫对动物生殖功能影响的研究作一综述。     

猪场猪链球菌感染的诊断

2005年3月延边某猪场的猪群发生一种传染病，其特征是各种年龄猪均有感染，但多为哺乳期的仔猪．临床症状为多数病猪体温升高，达41～42℃，呈稽留热，流浆液性、黏性鼻液，眼睑色暗，外观呈“黑眼圈”状，全身皮肤发红，重者高度呼吸困难．病程1～3d，或因窒息于短时间内死亡．病理变化表现为严重的纤维素性胸膜肺炎，胸腹腔有大量淡黄色液体，脾肿大，有的四肢关节囊内还可见黄白色奶酪样块状物或脓液．经过涂片镜检、分离培养、鉴别培养、生化试验鉴定、血清学鉴定和动物接种试验，最后诊断为猪链球菌感染．通过药敏试验，筛选出该菌株的敏感药物．     

猪乳外胞体总miRNAUnit对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制抑制的研究

通过对猪乳汁Exosome中总miRNA进行分离提取,以验证其对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的抑制作用。首先提取猪乳汁中的Exosome,并将提取的Exosome对感染PRRSV的MARC-145细胞进行初步处理,于24、48 h后进行病毒滴度测定,并在MARC-145细胞上接种PRRSV病毒96 h后对细胞形态进行观察;随后对猪乳Exosome中的总miRNA进行进一步提取,用提取的总miRNA处理感染PRRSV的Marc-145细胞,于24、48 h后进行病毒滴度测定,同时也在MARC-145细胞上接种PRRSV病毒96 h后对细胞形态进行观察。结果表明,转染猪乳Exosome和转染猪乳Exosome总miRNA细胞中的PRRSV滴度都显著低于转染PBS(阴性对照);同时相对于阴性对照组,转染猪乳Exosome和转染猪乳Exosome总miRNA的细胞形态排列较紧密,边缘较清晰整齐。说明猪乳Exosome中存在与抑制PRRSV复制有密切关系的miRNA,本研究将为PRRS的预防和治疗提供新的理论依据和途径。     

PRRSV GP5与GP4蛋白重组腺病毒的构建及其免疫特性研究

[目的]实现PRRSV GP5与GP4蛋白在同一载体中表达各自编码的蛋白,发挥GP5蛋白在体液免疫中的优势和GP4蛋白在信号转导中的作用。[方法]利用RT-PCR扩增出GP5与GP4基因,克隆到pIRESneo载体的多克隆酶切位点及新霉素磷酸转移酶位点中,用XhoⅠ和NruⅠ双酶切含GP5和GP4基因的表达盒,将此表达盒克隆到犬2型腺病毒E3区缺失性载体pPolyⅡ-CAV-2-△E3中,以AsⅠc和PmeⅠ双酶切进行鉴定。[结果]将构建好的重组腺病毒免疫小鼠,可以诱导产生较强的体液免疫应答（ELISA抗体和中和抗体）。[结论]该重组腺病毒具有较好的免疫原性,可为研制有效的亚单位疫苗奠定基础。