抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的提纯和鉴定

取抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体．经饱和硫酸铵盐析，透析除盐、葡聚糖凝胶过滤粗提后，经ＤＥＡＥ—２２纤维素离子交换层析，获得纯化的单抗，ＥＬＩＳＡ效价达１０（－６）以上．双向琼扩效价达１：６４以上；抗体回收率达６０％以上；最高浓度达１．２ｍｇ／ｍｌ．经抗鼠全血清双向琼扩结果证明所提取物为纯一的ＩｇＧ．     

抗猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体的研制及应用

将纯化的猜传染性胃肠炎病毒免疫 BALB/C 小白鼠后,取免疫脾细胞与骨髓瘤细胞在 PEG 存在下进行融合,HAT-1640培养液筛选,并用 ELISA 间接法检测阳性克隆。通过有限稀释法进行三次克隆化后,获得了二株稳定分泌抗 TGEV 的单克隆抗体杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞染色体皆在95条以上;其分泌抗体均属 IgG_1亚类。通过阻断试验证明其作用的特异性。对该单抗在诊断上的初步应用作了探讨。     

分泌抗IBDV单抗的杂交瘤细胞在新型5L细胞反应器中连续培养的研究

能稳定分泌抗IBDV单抗的杂交瘤细胞,直接从方瓶中接种进入已改装的新型5L细胞反应器,接种浓度不少于3×10~8个细胞/L,细胞在pH7.10、DO55、50～70r/min、37℃的培养条件下生长良好;在保持反应器内的葡萄糖浓度不低于1;,.0g/L的情况下,平均每天可生产单抗3L左右,产物的平均OD值为0.368,持续周期达30d左右。     

猪细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

用经超滤浓缩、PEG 沉淀,氯化铯密度梯度离心纯化的猪细小病毒(PPV)免疫 BALB/C 小白鼠,取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞 SP_2/O在PEG 存在下融合,经 HAT 筛选、ELlSA 测定及3次克隆化后,获得3株(P-15—36—6,P-15—45—51,P—15—52—28)能持续稳定分泌抗 PPV 单克隆抗体的杂交瘤细胞株,3株杂交瘤细胞的染色体数均在95条以上,经分类测定,其免疫球蛋白均属 Ig G,且均为 IgG_1亚类。阻断试验证明单抗具有抗 PPV 的特异性。利用间接 ELISA 抑制试验进行了单抗在诊断上应用研究。     

抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的定量检测

以免抗鼠 IgG 作为抗血清,首先验证了应用单向琼脂扩散法与酶联兔疫测法(ELISA)测定中试样品中抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)单抗浓度的相应关系;以 DEAE 纤维离子交换层析法纯化的鼠 IgG(3.8mg/ml)作标准样品,以单向琼扩法确定中试样品 F.中具有生物活性单抗含量为330uG/ml,并以 F.作为 ELISA 标准样品,作标准曲线,检测不同样品中抗 IBDV 单抗含量皆在50ug/ml(此为1:10稀稀应用的浓度标准值)以上,ELISA 效价皆在10~(-4)以上。证明了我们的中试产品 OD 值在0.050以上,都可以1:10稀释,可靠地投放市场广泛应用。     

抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的临床应用研究

采用纯化的抗鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）多抗作为第一抗体，抗ＩＢＶ单克隆抗体作为第二抗体，应用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法诊断鸡ＩＢＶ病。以多抗包被浓度为１：８０稀释，单抗１：４稀释，显色反应时间３０ｍｉｎ为最佳工作条件。该方法快速、简便、准确、特异性强。ＩＢＶ发病鸡服用１：１０稀释的单抗１ｍｌ／羽一次后有良好治疗效果。健康鸡服用单抗后无任何变态反应。初步建立了抗ＩＢＶ单克隆抗体制剂及安全的治疗方法与诊断系统。     

引起猪腹泻的冠状病毒的分离与纯化

取患病典型的死猪小肠或肠系膜淋巴结．经匀浆、差速离心、蔗糖密度梯度离心而获得纯化的ＴＧＥＶ条带．通过电镜观察．病毒是圆形或椭圆形，并呈现冠状结构，经透析、浓缩和Ｆｏｌｉｎ酚试剂测定，病毒蛋白含量为２５０μｇ／ｍｌ．     

猪细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

用经超滤浓缩、PEG沉淀、氯化铯密度梯度离心纯化的猪细小病毒（PPV）免疫BALB／C小白鼠、，取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／O在PEG存在下融合，经HAT筛选、ELISA测定及3次克隆化后，获得3株（P－15－36－6，P－15－45－51，P－15－52－28）能持续稳定分泌抗PPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株，3株杂交瘤细胞的染色体数均在95条以上，经分类测定其免疫球蛋白均属IgG，且均为IgG1亚类，阻断试验证明单抗具有抗PPV的特异性，利用间接ELISA抑制试验进行了单抗在诊断上应用研究。     

杂交瘤细胞在细胞反应器中连续培养的研究

稳定分泌抗ＩＢＤＶ单克隆抗体的杂交瘤细胞（Ｉ—４—３），培养于５ＬＣｅｌｌｉｇｅｎ中，接种浓度不少于２ｘ１０９／Ｌ，杂交瘤细胞在Ｃｅｌｌｉｇｅｎ中生长，随着细胞数浓度的变化，其生物学和动力学参数发生相应的变化，杂交瘤细胞在ＰＨ７．１８、ＤＯ５０、５０～７０ｒ／ｍｉｎ及葡萄糖浓度为２．５ｇ／Ｌ下生长良好。每天可收集３Ｌ的单抗，结合抗体定量试验，测得具有生物学特性的抗体含量为３００ｍｇ／Ｌ以上。研究结果表明５ＬＣｅｌｌｉｇｅｎ可用于杂交瘤细胞在体外大规模生产单克隆抗体。     

鸡传染性支气管炎(IB)诊断方法的研究

本试验用鸡胚大量繁殖鸡传染性支气管炎病毒（IBV）,收集尿囊液,用1％胰蛋白酶处理制备IBV血凝抗原,建立了血凝—血凝抑制（HA—HI）检测IBV抗体的方法,其特异性强、操作简便。另外,本试验建立Dot—ELISA方法用于检测IBV,病料经处理后,点样于硝酸纤维素膜,加兔抗IBV抗体,经PPA—DAB—H_2O_2系统显色,其检测结果与双抗体夹心ELISA的检测结果一致。两种诊断方法的建立为临床上检测病原和监测抗体提供了便捷的手段。