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血凝素是副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragallinarum,Hpg)的主要抗原成分之一,鸡只对Hpg的免疫力与血凝素抗体滴度成正相关。根据GenBank上已发表的B型Hpg Dalian株的血凝素基因序列(AY622378),设计合成了1对特异扩增Hpg血凝素基因的引物。以大连分离株Hpg中提取的细菌DNA为模板,利用PCR扩增出了1038bp的血凝素基因,将其克隆到pET-32a载体上,构建了pET-HA原核表达质粒并在BL21。大肠杆菌中过量表达。血凝试验显示纯化的重组蛋白具有血凝活性;Western试验证明该重组蛋白可以被B型Hpg特异性鸡血清所识别。本研究在国内首次对Hpg的血凝素基因进行克隆表达,并分析了重组蛋白的血凝活性。 相似文献
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[目的]克隆和表达副猪嗜血杆菌菌毛蛋白pilA基因。[方法]对已发表的HPS的pilA序列进行分析,合成引物,并以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS的pilA编码基因,获得目的基因片段;构建重组表达质粒,经IPTG诱导表达至大肠杆菌BI21(DE3)中,进行SDS-PAGE与Western blot检测。[结果]表达的重组蛋白分子质量与预期的43 kD一致。[结论]该研究为制备亚单位疫苗和诊断试剂奠定了基础。 相似文献
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副鸡禽杆菌是巴氏杆菌科的一种短小革兰阴性菌,也是鸡传染性鼻炎的致病菌。为探讨副鸡禽杆菌感染后靶器官免疫相关因子的变化情况,用副鸡禽杆菌进行人工感染SPF试验鸡,分别在第3天和第6天采集鼻区组织,应用RT-qPCR方法检测了IL-1β、IL-6、IL-8、IFN-γ、IL-4、IL-10、TLR4、TLR5、TLR15、AvβDs 4和AvβDs 10的相对表达量;收集鼻黏膜洗液,检测sIgA水平。结果显示,感染组试验鸡IL-1β、IL-6、IL-8、IFN-γ、IL-4、IL-10、TLR4、TLR5、TLR15、β-防御素4、10相对表达量显著上升;鼻腔黏膜sIgA显著增高。提示前炎因子、趋化因子、Th1细胞因子、Th2细胞因子都参与了对副鸡禽杆菌感染的免疫调控,分泌的sIgA在抗副鸡禽杆菌感染过程中也起到重要作用。本研究探索了副鸡禽杆菌感染后细胞因子及抗体变化,对探寻新的免疫或治疗方法奠定了基础。 相似文献
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【目的】探究副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum)外膜蛋白lpxM的免疫原性,为预防鸡传染性鼻炎提供理论参考。【方法】构建pET-28a-lpxM原核表达载体,经PCR扩增和双酶切鉴定后将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG进行诱导表达,并对诱导时间和诱导浓度进行优化,用尿素缓冲液纯化重组蛋白lpxM并进行SDS-PAGE分析。利用Western blotting鉴定重组蛋白的特异性。将重组蛋白与MONTANIDEISA 71 VG佐剂制备成疫苗v-lpxM,通过动物试验观察重组蛋白的免疫效果。【结果】重组质粒pET-28a-lpxM转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后成功表达,在37 ku处有目的蛋白特异性条带,在37℃、700 mmol/L IPTG、诱导4 h时蛋白表达量最高;重组蛋白lpxM在上清和沉淀中均有表达,且在沉淀中表达量相对较高;Western blotting结果显示,C型副鸡禽杆菌Modesto株的阳性鸡血清与纯化后的重组蛋白可发生免疫反应。免疫保护试验结果显示,v-lpxM疫苗对A、B和... 相似文献
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最近几年,人类的食源性疫病事件在全世界范围内已大大增加。虽然传染源不明,但多涉及到禽类产品。家禽藏匿有不同的食源性致病菌。近几年的许多报道显示沙门氏菌(尤其是肠炎沙门氏菌)和弯曲杆菌是常见的与家禽相关的人类食源性致病细菌。最近,产生vetotoxin的大肠杆菌O157:H17(vTEC) 相似文献
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利用IBV重组N蛋白建立ELISA抗体检测试剂盒的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
利用表达鸡传染性支气管炎病毒Gray株N蛋白的基因工程重组菌,表达IBV—N蛋白,并利用表达载体上带有组氨酸标记的特点,应用金属螯合填料将其纯化。用纯化的IBV—N蛋白作为包被抗原,成功地建立了一种检测血清中IBV抗体的间接ELISA方法。确定抗原最佳包被浓度为0.58μg/ml;被检血清的最佳稀释度为1:100;酶标二抗的工作浓度为1:1000。确定了血清样品阴、阳性临界0D值为0.14。与IDEXX公司IBV抗体检测试剂盒比较,结果表明自建ELISA试剂盒具有较高的敏感性和特异性。 相似文献
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副猪嗜血杆菌aroA基因自杀载体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
为了构建副猪嗜血杆菌aroA基因插入突变自杀载体,试验采用自杀质粒介导的同源重组方法首先构建了自杀质粒pSD,根据副猪嗜血杆菌aroA基因设计PCR特异性引物,上游引物5'末端加BamHⅠ位点,下游引物5'末端加SalⅠ位点,PCR扩增aroA基因后连接到T载体,经酶切位点分析发现在aroA中有1个HindⅢ位点,将氯霉素表达盒通过该位点,构建T-aroA-cm载体,再通过BamHⅠ和SalⅠ将aroA-cm定向克隆到自杀质粒pSD中。结果表明:成功获得aroA基因插入突变自杀载体。说明进一步进行同源重组,从而构建副猪嗜血杆菌aroA基因插入突变株。 相似文献