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TA50-10是小麦中的一个截短的cDNA序列,与水稻白叶枯病菌harpin蛋白基因hpa1x∞(又称hrfl,hrfA)具有59%的一致性,它编码的多肽有类蛋白激酶催化域(Protein kinase like domain).为了研究TA50-10蛋白质的生物学性状和功能以及与harpin蛋白的关系,用PCR法从小麦cDNA中扩增到TA50-10基因,并以pET30a(+)为载体构建了原核表达重组体pEY30-TA50-10.将其转化大肠杆菌后在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)的诱导下获得了表达蛋白质,并研究了该表达蛋白质诱导烟草抗烟草花叶病毒(TMV)的作用.结果表明:原核表达的TA50-10蛋白质具有热稳定性;用热处理后部分纯化的TA50-10蛋白质溶液喷施烟草叶片能够诱导三生烟草局部抗TMV,并且诱抗效果在处理后10 d内没有明显改变. 相似文献
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水稻白叶枯病菌及其毒素引起烟草叶片组织坏死机制的研究 总被引:5,自引:2,他引:3
水稻白叶枯病菌JXO Ⅲ细胞悬浮液及其分泌的毒素溶液接种到烟草叶片中,都能在烟草叶片上产生快速的坏死反应。引起坏死反应所需的最短时间分别为接种后8 h和0.5 h。低浓度的JXOⅢ(< 107 cfu/ml)接种后36~48 h内形成褪绿斑,而低浓度的毒素(< 2.5 mg/ml)接种后随时间延长在接点无任何可见变化。依文斯蓝(Evans blue)染色发现,毒素和JXOⅢ分别在接种后0.5 h和6 h内细胞大量死亡。叶圆片法测定表明,接种毒素后2 h内烟草细胞膜透性迅速上升,接种JXOⅢ后9 h细胞膜透性开始明显上升。毒素处理的烟草叶片中LOX、POX、SOD、CAT活性水平较对照降低,而JXOⅢ处理中上述酶活性较对照有不同程度的增加。蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺,RNA合成抑制剂放线菌素D和钙离子通道阻断剂氯化镧分别以7.1×10-5 M、1×10-4 M和1×10-3 M浓度有效地抑制JXOⅢ在烟草上形成坏死反应,这些抑制剂对毒素在烟草上的坏死反应则没有影响。 相似文献
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将水稻白叶枯病原菌Xanthomonas oryzae pv.oryzae编码harpinXoo蛋白的hpalXoo基因构建植物重组表达质粒pCAMBIA3300-hpalXoo-bar,由根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens LBA4404介导,叶盘法转化寒菊QW-077,获得了草丁膦转基因寒菊株系.经PCR、Southern blot和RT-PCR 检测证明 hpalXoo已整合到寒菊基因组中.在转基因株系的叶片和植株上抗虫性鉴定表明,转基因寒菊显著抑制桃蚜 Myzus persicae的繁殖(t<0.01).RT-PCR表明转基因植株中hpalXoo能够在转录水平正常表达.hpalXoo转化寒菊可以正常表达并提高寒菊对蚜虫的抗性. 相似文献
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青枯病是由细菌引起植物枯萎的维管束病害。除土壤外,带菌的繁殖材料如块茎和苗木也是重要的侵染来源。为了防止病害进一步扩展蔓延,对繁殖材料的检疫是一项重要的工作。 间接血凝抑制技术是一种微量快速的血清学方法,特别适用于检测组织中的病原物(如细菌),无需特殊设备,在2—3小时内即可获得结果。 检测结果证明,用间接血凝抑制技术测定植物青枯病,特异性强,灵敏度高。每毫升含2×10~4个细菌的菌液为明显阳性,每毫升含2×10—2×10~3个细菌的菌液为可疑阳性反应。而且只需制备一种青枯菌菌株的抗血清即可检测各种植物青枯病。 间接血凝抑制技术目前已试用于姜瘟病病姜块的检测和甘薯瘟病的病薯和病苗的检疫。 相似文献
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水稻细条斑病菌的化学诱变及hrp基因突变体的功能互补研究 总被引:8,自引:0,他引:8
硫酸二乙酯(DES)化学诱变水稻细条斑病菌(Xanthomonasoryzaepv.oryzicola)RS105获得6株hrp突变体,其在寄主水妥上失去致病性和在非寄主烟草上失去激发过敏反应(hrpersensitive response,HR)的能力。将水稻白叶枯病菌(X.oryzaepv.oryzae)日本系统Ⅲ号小种(JOXⅢ)基因文库和RS105基因文库互补RS105hrp突变体M55, 相似文献
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核黄素启动植物生长信号通路的初步研究 总被引:11,自引:1,他引:11
报道了核黄素促进植物生长的效应及分子反应。在实验室内对7种粮食、蔬菜和经济作物使用核黄素后,植物生长量增加23.8%-85.4%。在田间试验中,烟草使用核黄素后,生长量提高35.9%-108%。烤烟叶产量提高44.7%-110.3%。在拟南芥上,核黄素处理可以诱导PR-3b、PDF1.2、ETR1和EIN2基因的表达;PR-3b和PDF1.2是乙烯信号通路的分子标志,乙烯/茉莉酸信号传导可以调控植物生长发育;ETR1和EIN2是乙烯信号通路上,下游的关键调控基因,其产物分别作为乙烯的受体和转录调控因子起作用。根据以上这些结果,核黄素启动了植物生长信号传导通路的分子反应,促进了植物生长。 相似文献
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Harpinxoo多克隆抗体制备、鉴定与应用 总被引:2,自引:0,他引:2
以纯化harpin蛋白为抗原免疫新西兰白兔,制备兔抗Harpin蛋白的多克隆抗体,经ELISA法测定抗体效价为1:2000,经亲和层析纯化,Western blot分析制备抗体与原核细胞体外表达的harpin蛋白可以特异性结合,表明该抗体的特异性良好。应用该抗体验证harpin编码基因在转基因水稻中在翻译水平的正常表达。因此,兔抗harpin抗体的成功制备,为进一步深入研究harpin的生物学功能、细胞定位以及在其他植物中的表达等奠定基础。 相似文献
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将水稻白叶枯病原菌Xanthomonas oryzae pv.oryzae编码harpinXoo蛋白的hpa1Xoo基因构建植物重组表达质粒pCAMBIA3300-hpa1Xoo-bar,由根癌农杆菌Agrobacterium tumefa-ciensLBA4404介导,叶盘法转化寒菊QX-077,获得了草丁膦转基因寒菊株系。经PCR、Southernblot和RT-PCR检测证明hpa1Xoo已整合到寒菊基因组中。在转基因株系的叶片和植株上抗虫性鉴定表明,转基因寒菊显著抑制桃蚜Myzus persicae的繁殖(t〈0.01)。RT-PCR表明转基因植株中hpa1Xoo能够在转录水平正常表达。hpa1Xoo转化寒菊可以正常表达并提高寒菊对蚜虫的抗性。 相似文献
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截短的小麦冷胁迫反应蛋白基因片段TA3-13的融合表达、纯化与诱导抗TMV功能研究 总被引:1,自引:0,他引:1
TA3-13是小麦中一个冷胁迫蛋白WCSP1编码基因的5′端截短的DNA序列。它与水稻白叶枯病菌Harpin蛋白的编码基因hpa1_(X∞)(又称hrf1,hrfA)具有59%的一致性。为了研究TA3-13蛋白的生物学性状和功能及其与Harpin蛋白的关系,本研究以pET30a(+)为载体,构建了His融合表达重组体,转化大肠杆菌后在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)和阿拉伯糖的诱导下获得了融合蛋白的表达。利用镍柱对融合蛋白进行了纯化研究,结果表明:融合蛋白在200 mmol·L~(-1)咪唑浓度下能够被有效地洗脱下来,电泳显示具有单一条带。烟草花叶病毒(TMV)接种试验显示:纯化的TA3-13蛋白喷雾烟草后仍具有较高的诱导烟草抗TMV的作用。 相似文献