迟钝爱德华氏菌Ⅲ型分泌系统基因的克隆及多重PCR检测方法的建立

采用PCR法扩增大菱鲆Scophthalmus maximus出血性败血症病原菌迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda L-49231菌株Ⅲ型分泌系统(TTSS)的装置蛋白(esaC)、效应蛋白(eseB、eseC、eseD)和调节蛋白(esrA、esrB)6种基因,并将其克隆到载体PMD19-T中分别进行测序;通过优化反应条件,建立一次检出效应蛋白eseB、eseC和eseD 3种基因片段的多重PCR方法;采用所建立的多重PCR方法检测迟钝爱德华氏菌不同菌株(L-49231、GhAn080310、GhAn080313和GhAn080314)、沙门氏菌Salmonella enterica、大肠杆菌Escherichia coli和肠杆菌Enterobacter中效应蛋白基因的存在情况.结果表明:L-49231菌株中存在esaC、eseB、eseC、eseD、esrA和esrB 6种基因片段,大小分别为837、184、934、445、464、458 bp,与GenBank 中迟钝爱德华氏菌PPD130/91菌株的这6种基因的同源性分别为99％、97％、99％、99％、99％、98％;通过优化反应条件,在退火温度为54 ℃,基因eseB、eseC和eseD引物浓度(μmol/L)组合比为5∶10∶2,Mg2+浓度为1.5 mmol/L时,能够得到清晰、稳定且均一的多重PCR产物,并与目的条带分子量一致;采用所建立的多重PCR方法进行检测,迟钝爱德华氏菌L-49231菌株中存在eseB、eseC和eseD 3种基因片段,迟钝爱德华氏菌GhAn080310、GhAn080313、GhAn080314菌株中存在eseB和eseC基因片段,但未检出eseD基因片段;沙门氏菌、大肠杆菌和肠杆菌中均未检出eseB、eseC和eseD基因.表明所建立的多重PCR方法对迟钝爱德华氏菌具有较好的特异性,可检出具有Ⅲ型分泌系统效应蛋白的菌株.     

南充市玉米高产创建栽培技术

玉米是我国三大粮食作物中的一种,对玉米高产栽培技术进行研究,有助于玉米实现增产增收,保障农民经济收益,还对保证国家粮食安全也起到了重要作用.四川省农业厅于2006年就在南充市展开了玉米高产创建技术试验示范,在农村地区对玉米高产栽培技术进行了推广应用,并获取了较好效果.历经这些年的经验积累,该地区玉米高产创建栽培技术体系...     

油库火灾爆炸灾害浅析

油库火灾爆炸灾害(以下简称火爆灾害)是世界各国的主要灾害之一。本文以油库火爆灾害222例的统计数据,浅析如下。 一、油库火爆灾害的重要燃烧物 油库是储存和供给油料的基地和中转站,油料的化学组成及其流动性、蒸发性、易燃易爆性和易产生积聚静电等理化特性,决定了油料是油库火爆灾害的主要燃烧物。