捻转血矛线虫(H.contortus)ZJ株H11蛋白基因的克隆及序列分析

参照已发表的捻转血矛线虫H11蛋白基因序列设计引物，以H．contortuss ZJ株的总RNA为模板，进行RT—PCR扩增，成功扩增出H11基因。将PCR产物与pUCm—T载体连接后，转化DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆并测序。序列分析表明，其核苷酸序列与国外报道的H11基因的同源性为99．5％。编码氨基酸序列具有氨基肽酶的保守序列，推测可使虫体不能获得所必需的氨基酸而导致死亡。     

浙江近岸海域细菌学分析

调查分别于1998年5～6月和9～10月进行2个航次,对浙江近岸海域30个站位的表层和底层海水样品进行了细菌学检测.结果表明,第一航次以浙中海域的粪大肠菌群和异氧菌总数最高,第二航次以宁波海域粪大肠菌群最高,而异氧菌总数以三门湾最高.两个航次表层和底层海水粪大肠菌群超标率最高为16.7%,异氧菌总数超标率均达89.3%以上.第一、二航次表层海水粪大肠杆菌单项污染指数平均值分别为0.229±0.452和0.375±0.630,异氧菌总数单项污染指数平均值分别为8.6±11.178和12.8±18.796.底层海水中粪大肠杆菌单项污染指数仅在第一航次宁波近岸的JN-1108站位超标;异氧菌总数单项污染指数第一、二航次最大值分别为37.0和18.0, 也出现在宁波近岸的JN-1108站.分析显示,粪大肠菌群与异氧细菌总数存在一定的正相关关系,其相关系数r2=0.34.结果表明,浙江近岸海域已明显受到异氧菌的污染, 宁波近岸海域已遭到粪大肠杆菌和异氧菌的污染.     

中草药制剂防制鸡柔嫩艾美尔球虫病的效果研究

鸡球虫病是影响养鸡生产的重要寄生虫病，试验采用单味钩藤和以钩藤为主的中草药复方制剂进行抗球虫病的疗效试验。按给药剂量分为9组，每组10羽，1、2、3组给药剂量分别为0．5ml、1．0ml、1．5ml的单味钩藤中药组，4、5、6组则以钩藤为主的中草药复方制剂组及地克珠利组、感染不给药组和不感染不给药组。结果表明，单味钩藤中药1、2、3组和以钩藤为主的中草药复方制剂4、5、6组、地克珠利组的抗球虫指数（ACI）分别为177．1、181．4、182．1；179．9、182．4、188．5；185．4，单味钩藤中药1组和以钩藤为主的中草药复方制剂4组为轻度抗荮陛，其余均为敏感。结果表明，钩藤对抗鸡柔嫩艾美尔球虫具有显著疗效。由于中草药具有毒性低，使用安全、残留少等优点，在防制鸡球虫病方面具有良好的应用前景。     

弓形虫速殖子表膜蛋白的研究进展

弓形虫的生活史可分为有性生殖和无性生殖2个阶段,无性生殖阶段又有缓殖子和速殖子2个阶段,其中速殖子阶段的危害最为严重。作者就速殖子表膜蛋白的相关性、在速殖子和缓殖子转换中的作用、表膜蛋白基团GP1的锚定作用以及表膜蛋白生物工程疫苗方面的研究综述如下。1弓形虫速殖子的表膜蛋白弓形虫速殖子的表膜蛋白大约有1000多种,其中主要的有5种,包括SAG1(P30)、SAG2(P22)、P23、P35和P43。SAG1是速殖子中含量最丰富的蛋白,仅在弓形虫的速殖子期表达。SAG1基因为单拷贝基因,无内含子,弓形虫没有在SAG1基因的转录启动子TATA,在SA…     

我国兔豆状囊尾蚴病的研究进展

兔豆状囊尾蚴病是由豆状带绦虫（Taenia pisiformis）的幼虫豆状囊尾蚴（Cysticercus pisiformis）寄生于兔的肝脏、大网膜、肠系膜和腹腔内引起的一种绦虫病。该病呈世界性分布，我国各地均有发生。     

捻转血矛线虫感染性三期幼虫gst基因的筛选及抗干燥功能分析

为研究干燥作用对捻转血矛线虫L3期幼虫mRNA表达的影响,筛选并分析干燥相关表达基因,本试验利用mRNA差异显示技术得到了捻转血矛线虫干燥相关基因,通过相对荧光定量PCR验证所获基因的表达情况,并在秀丽隐杆线虫中通过RNA干扰抑制相关同源基因的表达检测干燥后复苏虫体生存率以研究基因抗干燥功能。结果显示,差异表达序列GH-U02A与已知捻转血矛线虫谷胱甘肽-S-转移酶(GST)氨基酸同源性为94%。对秀丽隐杆线虫Ce-gst-7基因进行RNA干扰后,虫体在干燥后的生存率降低,证明gst基因在线虫中有抗干燥功能。     

牛血液多形核白细胞吞噬功能检测方法的研究

以啤酒糖酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）为吞噬材料，用吖啶橙染色指示牛血液多形核白细胞的吞噬活性。该方法直观、简便、可靠，一项试验可同时获得吞噬百分率、杀伤百分率、吞噬指数和杀伤指数４项指标，从不同角度反映了机体免疫功能状态。此外，用透射电镜和扫描电镜观察了牛血液多形核白细胞吞噬经牛血清调理的啤酒糖酵母的情况。     

金华地区奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验

奶牛乳房炎是奶牛三大疾病之一。据有关资料报道，国外奶牛乳房炎发病率约为25％～60％。据我国有关部门不完全统计，乳房炎是我国奶牛最严重的疾病之一，发病率达20％～70％，个别牛群发病率甚至更高。奶牛乳房炎不仅影响产奶量(可降低产奶量10％～15％)，而且影响乳的品质，甚至危及人的健康。     

捻转血矛线虫Hc-FAR-4蛋白的表达特性及其与配体结合能力分析

【目的】捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)寄生在牛羊等反刍动物的皱胃中,引起的捻转血矛线虫病在我国呈全国性流行。文章通过研究脂肪酸与视黄醇结合相关蛋白Hc-FAR-4的表达特性及配体结合能力,以了解其在捻转血矛线虫生长、发育、繁殖过程中的作用。【方法】对Hc-far-4进行克隆、并且构建原核表达载体pET-30a-Hc-far-4,pET-30a-Hc-far-4重组质粒经过PCR与双酶切鉴定准确无误之后转化到E. coli BL21感受态细胞中,用0.1 mmol·L ^-1IPTG(isopropyl-β-d-thiogalactoside)进行重组蛋白的诱导表达。收集重组蛋白rHc-FAR-4,利用荧光分析法,研究rHc-FAR-4蛋白与DAUDA、视黄醇、油酸的结合能力。配体结合试验是依据荧光物质retinol与脂肪酸类似物DAUDA在极性和非极性溶液中,在某一波长的激发光激发下,所发出的荧光光谱随之变化的特性,判断rHc-FAR-4蛋白是否具有与DAUDA、retinol结合的能力。再在体系中加入非荧光长链脂肪酸油酸,根据荧光光谱的变化情况判定油酸能否分别与DAUDA、retinol竞争目的蛋白的脂肪酸结合位点,间接说明目的蛋白能否与非荧光脂肪酸油酸结合。同时制备鼠源多克隆抗体,利用ELISA技术检验免疫后小鼠的抗体效价,抗体效价合适即可收集小鼠血清。收集的血清用于免疫组织荧光（IHF）试验,探究Hc-FAR-4的表达部位,从而推测其功能。该试验过程为：对捻转血矛线虫进行石蜡包埋,石蜡切片,抗原修复,3%的BSA 于4℃封闭过夜,自制鼠源多克隆抗体作为一抗孵育1 h; Alexa Fluor? 488 nm羊抗鼠IgG作为二抗避光孵育1 h,DAPI染色30 min,激光共聚焦显微镜检查染色情况。利用荧光定量PCR技术分析Hc-far-4在捻转血矛线虫各个主要阶段的表达特性。【结果】成功克隆目的基因Hc-far-4,测序结果与Sanger数据库中捻转血矛线虫far-4基因序列（>HCISE00908800.t1）相似度为 99.9%;重组质粒 pET-30a-Hc-far-4在E. coli BL21中成功表达,在诱导8 h后达到峰值。经过ELISA检测,结果显示制备的鼠源多克隆抗体效价达到1﹕1 024 000—1﹕2 048 000,可用于后续试验。Western Blot鉴定结果显示rHc-FAR-4重组蛋白带有His标签,并且条带大小为25 kD,结果符合预期。制备的鼠源多克隆抗体经过Western Blot鉴定,能够与天然Hc-FAR-4 蛋白结合,说明该抗体可用于IHF试验。配体结合试验结果表明 rHc-FAR-4蛋白具有结合脂肪酸与视黄醇的能力。荧光定量PCR分析表明,Hc-far-4在四期幼虫中的转录水平最高;IHF试验表明,Hc-FAR-4主要表达在捻转血矛线虫的肠壁、性腺中。综上推测Hc-FAR-4蛋白主要在寄生生活阶段参与了转运脂肪酸与视黄醇,为捻转血矛线虫的生长发育与生殖提供营养物质。【结论】捻转血矛线虫 FAR-4 蛋白能够结合脂肪酸类似物DAUDA和视黄醇,但是与油酸的结合能力较弱,主要表达在肠壁,在性腺、角皮中也有少量表达,其基因在进行营寄生生活阶段时表达量达到峰值。