利用单线虫多重PCR技术快速制备DNA分子量标准

基于单只线虫6对染色体及多重PCR技术建立一种特异性扩增特定长度核酸片段的方法,进而探索其在常规核酸分子量标准制备中的应用。利用多重PCR引物设计及特异性评估软件以秀丽线虫6对染色体为模板,分别设计扩增不同长度核酸片段的特异性引物对,并直接对单只秀丽线虫进行多重PCR扩增,采用20g/L琼脂糖凝胶电泳进行分离鉴定并采集图像,通过系统研究优化获得特异性高的1～6重PCR扩增产物,产物大小经鉴定与预期目的条带一致,6重PCR扩增产物条带与常规分子量标准DL 2 000相应条带完全吻合,说明采用该方法能够有效制备特定片段大小的分子量标准。     

大鼠甘油醛3 磷酸脱氢酶的原核表达、纯化及其酶活动态监测

利用大肠杆菌原核表达系统高效表达大鼠甘油醛3-磷酸脱氢酶,并结合蛋白分离纯化技术获得高纯度样品,动态监测其酶活。通过RT-PCR技术,扩增PC12细胞中甘油醛3-磷酸脱氢酶编码序列并亚克隆到原核表达载体pET28b;鉴定正确后,转化入大肠杆菌BL21(DE3)细胞并采用诱导剂IPTG(终浓度1mmol/L)诱导表达,表达产物采用15% SDS-PAGE鉴定,用镍柱对蛋白进行纯化及脱盐;最后将分离纯化产物在体外进行甘油醛3-磷酸脱氢酶酶活动态分析。结果表明,成功构建大鼠甘油醛3-磷酸脱氢酶的原核表达载体pET28b-G3PDH;高效表达甘油醛3-磷酸脱氢酶,表达产物占总蛋白35%,且发现表达产物主要以可溶形式分布于裂解上清;制备甘油醛3-磷酸脱氢酶纯品并通过酶活动态扫描显示其具有高效酶活性。通过大肠杆菌原核表达技术高效制备具有重要酶活作用的大鼠甘油醛3-磷酸脱氢酶,为进一步研究其在糖代谢中的功能以及其可能的新功能奠定基础。     

秀丽隐杆线虫学习行为研究方法

秀丽隐杆线虫具有受机械接触、温度、化学物质、离子、外激素等多种环境刺激产生敏感反应的能力,其已被证明是研究行为可塑性的理想模式生物。文章阐述了秀丽隐杆线虫非联合型学习和联合型学习的研究方法、研究模型和相关分子遗传机制,为了解高等动物学习过程、机理及相关疾病研究提供了重要信息。     

扩容性血液稀释对缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用

【目的】探讨扩容性血液稀释对缺血再灌注大鼠脑损伤的影响。【方法】以健康成年雄性SD大鼠为试验动物,制备缺血再灌注脑损伤模型。于脑缺血2 h后,以生理盐水为血液稀释剂,在再灌注时通过尾静脉注射生理盐水对模型大鼠进行扩容性血液稀释,生理盐水注射剂量分别为0.5,1.0,2.0 mL/只,于再灌注6,9,12,24 h时取大鼠脑样本,制备切片,用2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)染色,然后以图像分析方法计算TTC染色面积和脑梗死体积。【结果】生理盐水血液稀释对缺血再灌注大鼠脑损伤具有保护作用,随着生理盐水注射剂量的增加,SD大鼠脑梗死体积呈降低的趋势,注射2.0 mL生理盐水组脑梗死体积显著低于对照组。【结论】扩容性血液稀释能显著降低大鼠缺血再灌注模型脑梗死面积,对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。