贵州省鸡心包积液-肝炎综合征实验室诊断与病原基因分型

为证实鸡心包积液-肝炎综合征(hydropericardium hepatitissyndrome,HHS)在贵州省的流行、病原遗传变异和基因分型情况,对贵州首个疑似HHS病例进行实验室检测,并基于Hexon基因进行病原基因分型。结果显示:病例组织材料中PCR扩增获得约295 bp特异性Hexon基因片段;基于Hexon基因分型显示,本病例病原与国内外报道的禽腺病毒Ⅰ群血清4型(FAd V-4)同源性高达100%,与禽腺病毒Ⅰ群代表株CELO株(U46933)同源性达到64.5%;系统进化分析显示,FAd V-4贵州流行株与禽腺病毒Ⅰ群代表株CELO株和FAd V-4国内外流行株均处于同一进化分支,而与禽腺病毒Ⅱ群和禽腺病毒Ⅲ群处于不同进化分支。结果表明:本病例确为贵州省首次报道HHS病例,病原基因分型为禽腺病毒Ⅰ群血清4型,研究结果为贵州省HHS防控提供参考。     

禽腺病毒血清4型贵州株全基因序列分析

为了解禽腺病毒血清4型(FAdV-4)地方流行毒株的分子进化情况,基于实验室分离的2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株,分别对2株FAdV-4毒株进行PCR分段扩增,扩增产物克隆至载体,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后筛选出重组质粒进行测序,将测序结果依次拼接得到病毒的全基因组,获得FAdV-4贵州株的全基因序列,并对其进行序列和遗传进化分析。结果显示,通过PCR分段扩增成功获得了2株FAdV-4贵州株(GZ-BJ株和GZ-QL株)的全基因序列,长度分别为43352、43723 bp,FAdV-4 GZ-BJ株全基因序列长度比FAdV-4 GZ-QL株短371 bp,少6个ORF(22K、putative 9.1 ku、u-exon、ORF17、ORF28、ORF42),二者的氨基酸同源性为57.1%。2株FAdV-4贵州株同国内外不同地区FAdV-4毒株核苷酸同源性在88.7%~100%,与FAdV-4经典毒株ON1比对,2株FAdV-4贵州株和国内FAdV-4分离株均缺失ORF19、ORF27、ORF30。系统进化树分析显示,2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株仍属于Ⅰ群C种FAdV。研究结果表明,2株贵州株FAdV-4 GZ-BJ株和FAdV-4 GZ-QL株较国内外FAdV-4毒株均存在进化与突变,且FAdV-4 GZ-BJ株变化较大,但尚未改变其血清型,这为探索FAdV-4致病机理的分子机制研究提供依据。     

基于Fiber1基因分型的安卡拉病毒感染病例实验室检测

为确诊贵州省某养鸡场发生疑似安卡拉病毒感染的病例,实验基于安卡拉病毒Fiber1基因设计合成引物,对病料样本进行病原核酸检测和核酸测序与序列分析。结果:(1)从病例的肝脏样本中扩增出大小约1 296 bp的Fiber1基因目的片段,与预期结果相符。(2)序列测定与分析显示,扩增的Fiber1基因序列与国内分离株序列同源性高,亲缘关系近。(3)系统进化分析显示,感染病例中的安卡拉病毒流行株(命名为:GZ-LPS)与K31、MX-SHP9、ON1和河北、江苏等地的FAdV-4分离株处于同一进化分支,而与其他血清型禽腺病毒株处于不同进化分支。结论:此次疫情经实验室诊断,确定为禽腺病毒Ⅰ群C种血清4型的安卡拉病毒感染所致。     

山羊痘病毒TK基因的克隆与序列分析

设计特异性引物并应用PCR方法扩增山羊痘病毒QL、LD、Y、B株TK基因序列片段,将其克隆至pMD 18-T载体,构建重组质粒pMD18-T-TK.再将该重组质粒转化DH5α感受态细胞进行培养,对通过PCR、酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列测定.TK基因核苷酸和氨基酸同源性分析表明,4株测序毒株TK基因与参考毒株的同源性均为96.6%～100%,说明羊痘病毒TK基因具有高度的保守性.     

贵阳地区新发生猪传染病的血清学检测

采用血清学方法对贵阳地区部分种猪场、规模饲养场及农村散养户猪群分别进行PPV、PRV、PRRS、PCV及APP抗体水平监测。以乳胶凝集试验检测PPV抗体阳性率为0%（0/160）;以间接ELISA检测PCV和PRRS的抗体阳性率分别为14%（28/200）和0.62%（1/160）;以竞争ELISA检测PRV的gpI抗体阳性率为19.14%（36/188）;以间接血凝试验检测APP的抗体阳性率为19.14%（36/188）。结果表明,PPV和PRRS似乎不是引起贵阳地区猪繁殖障碍的主要原因,而PRV和APP在非免疫猪群中的抗体阳性率较高,应引起该地区养猪业的高度重视。     

仔猪PRRS母源抗体消长规律的测定

猪繁殖与呼吸障碍综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)俗称"蓝耳病",是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)引起的以妊娠母猪发生流产、死胎、木乃伊胎和幼龄仔猪呼吸道症状为特征的急性接触性传染病.     

羊痘病毒P32基因生物信息学分析

为获得羊痘病毒P32基因生物信息学资料,扩增山羊痘病毒贵州LD株的P32基因,并进行克隆、测序与序列分析;以P32基因的推导氨基酸序列为材料,应用计算机技术和生物学软件预测P32蛋白的跨膜结构、亲水性、抗原指数、柔韧性、表面可及性和二级结构,综合评价P32蛋白的抗原表位.结果表明,羊痘病毒P32基因核苷酸和氨基酸同源性...     

猪繁殖与呼吸综合征病毒、圆环病毒2型、奇异变形杆菌混合感染病例的病原学诊断

为确诊贵州省都匀市某养殖场的猪死亡病因,采集病死猪病料进行猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型核酸检测,细菌分离鉴定及药物敏感试验。结果:猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量RT-PCR检测和猪圆环病毒2型PCR检测核酸均为阳性,其余病毒核酸检测均为阴性。细菌分离培养表明存在细菌感染,分子生物学鉴定为奇异变形杆菌;分离菌对硫酸安普霉素、硫酸粘菌素、盐酸大观霉素+盐酸林可霉素、氟苯尼考较敏感,对多种药物产生耐药。结论:确诊病例为猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、奇异变形杆菌混合感染。     

山羊痘病毒贵州分离株P32基因的克隆及序列分析

山羊痘(goat pox)是由羊痘病毒属(capripox-virus)山羊痘病毒(goat poxvirus,GPV)引起的一种主要危害山羊的高度接触性传染病[1]。本试验应用PCR技术,从山羊痘病毒DNA中扩增P32基因,通过pMD18-T克隆载体转化到DH5α工程菌中,并进行重组质粒的鉴定,旨在探索山羊痘病毒贵州株与国     

绵羊肺炎支原体感染对贵州不同品种山羊肺脏和血液Toll样受体基因转录水平的影响

绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)可引起山羊、绵羊发生支原体性肺炎,分析绵羊肺炎支原体感染对贵州不同品种山羊Toll样受体(TLRs)基因转录水平的影响。应用TaqMan RT-qPCR对Mo人工感染的贵州黑山羊、贵州白山羊、黔北麻羊和波尔山羊的肺脏和血液样本TLRs基因转录水平进行定量检测与分析。结果显示,不同品种山羊感染Mo后,肺脏样本中贵州黑山羊和贵州白山羊TLR1/2/4/6/8/9/10基因、黔北麻羊和波尔山羊TLR4/6/7/8/10基因转录水平均极显著上调(P<0.01),血液样本中贵州黑山羊TLR2/4/6/7/8/9基因、贵州白山羊TLR2/4/6/7/8基因、黔北麻羊TLR4/6/7/8/9基因、波尔山羊TLR4/6/8/10基因转录水平均极显著上调(P<0.01);且发现不同品种山羊间TLRs基因的转录水平也存在显著差异,最先出现死亡的贵州白山羊、贵州黑山羊肺脏样本中TLR1/6/8/10基因转录水平上调倍数显著高于其余品种山羊(P<0.05),而TLR2/4/5/7/9基因转录水平上调倍数显著低于黔北麻羊和...